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为了提高动物的疾病治疗效果,抗生素在养殖业中被广泛使用。但在家畜生产中禁止使用抗生素已是必然的趋势,因此,开发经济、有效的抗生素替代品已迫在眉睫。部分益生菌能够平衡动物胃肠道微生物,增强机体免疫力,为研发抗生素替代品提供了重要路径。解淀粉芽孢杆菌-9(Bacillus anyloliquefaciens-9,(Bacillus-9)环境适应能力强,能够分泌多种消化酶抑制病原菌的生长。本文旨在探究优化解淀粉芽孢杆菌GBacillus-9菌制剂的制备工艺,并系统研究了该菌制剂对羔羊腹泻的防治效果。结果如下:(1)菌制剂制备:通过培养基筛选选出GBacillus-9最佳发酵培养基M9(X、Na2HP04、K2HP04、MgS04、NH4C1、NaCl),单因素试验结合中心复合实验(Central Composite Design,CCD)确定培养基各成分最佳配比(X 46.8 g/L、Na2HP048.5 g/L、K2HP043 g/L、NH4Cl 1.4 g/L、NaCl 0.5 g/L、MgS040.08 g/L);对发酵条件(温度、pH、接种量、转速、)进行优化(36℃、pH 7.0、5%接种量、180 rpm、10 h),通过小试发酵、喷雾干燥制定了具有抑菌活力菌制剂的制备路线。(2)GBacillus-9菌制剂对羔羊腹泻的防治效果:试验选取24只羔羊,每组12只,分为对照组(饲喂羊奶+3‰淀粉)和试验组(饲喂羊奶+3‰微生态制剂)。自由饮水,饲喂15天,试验结果如下:①羔羊腹泻防治效果:经过15天的饲喂,试验组腹泻羔羊的腹泻症状得到全部治愈,对照组羔羊腹泻率下降57%;试验组健康羔羊腹泻发病率为11%,对照组为44%。结果表明GBaacillus-9菌制剂对羔羊腹泻症状有明显的防治效果。②GBacillus-9菌制剂改变羔羊血清生理生化及免疫相关因子浓度:经过15天的饲喂,试验组羔羊血清免疫指标IgA、IgG、IgM均有升高趋势,其中IgA、IgG含量变化显著(P<0.05);免疫细胞因子IL-2、IL-4、IL-6含量均有升高,其中IL-4、IL-6含量显著升高(P<0.05)。试验组羔羊血清中TG和GPT含量升高显著(P<0.05),试验组羔羊血清SOD、NO、LZM等指标变化不显著(P>0.05)。结果表明GBacillus-9菌制剂能够提高羔羊血清免疫力。③GBacillus-9菌制剂对羔羊胃肠道微生物群落结构的影响:经过15天的饲喂,比较羔羊胃肠道微生物群落结构组成,分析发现试验组羔羊与对照组羔羊相比,胃肠道微生物多样性没有显著性差异(Pshannon>0.05),微生物群落结构组成较为相似;门水平上,菌制剂能够降低胃肠道厚壁菌门与拟杆菌门比例,属水平上能够显著增加肠道Collinsella、Bifidobacterium、Acetitomaculum,Prevotella等有益细菌属的相对丰度,降低瘤胃Blautia、Tyzzerella-4等促炎细菌属、致病细菌属的相对丰度。Spearman分析揭示羔羊胃肠道微生物与免疫的相关性,建立了细菌属与免疫球蛋白IgA、IgG、IgM以及免疫细胞因子IL-2、IL-4、IL-6之间潜在的联系。从属的水平解释了 GBacillus-9菌制剂通过对胃肠道微生物群落结构的调节,有效地改善羔羊胃肠道微生物菌群结构,从而显著防治羔羊腹泻。