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研究目的HtrA4(high temperature reguirement A4, HtrA4)是HtrA家族蛋白中不典型一员,HtrA家族蛋白是丝氨酸蛋白酶,对折叠错误和位置错误的蛋白起质控作用。最近几年,对HtrA1等已经有所报道,主要在调控滋养细胞分化及侵袭中起一定作用,但对HtrA4研究不多。研究表明子痫前期病人的HtrA4在胎盘及血清中表达水平均较正常血压的孕妇水平要低；相较正常绒毛,子痫前期的病人的HtrA4在合体滋养细胞层表达显著增多。已知GCM1(Glial cells missing1)是胎盘形成过程中的一个重要转化因子,调节作用于合体滋养细胞层分化的syncytin融合蛋白的表达,也调节促进胎盘血管生成的胎盘生长因子(PGF)的表达。Liang-Jie Wang[3]等通过染色质免疫沉淀芯片分析,确认HtrA4基因是GCM1的靶基因。本研究就HtrA4和GCM1在妊娠期高血压患者胎盘组织中的表达,探讨两者参与调节滋养细胞侵袭机制的关系,为子痫前期等病理妊娠的发病机制提供理论基础。实验方法1.研究对象随机收集山东大学齐鲁医院2013年4月～2013年7月产科住院的产妇胎盘60例,其中妊高症患者40例作为实验组(早发型子痫前期23例,晚发型子痫子痫前期17例),另选同期在本院正常晚期妊娠孕妇20例为对照组。子痫前期的诊断标准参照《妇产科学》(第8版)。两组的孕周、年龄均无统计学差异。所选对象无慢性高血压、糖尿病、心脏病、肾脏病等病史。2. RT-PCR提取总RNA后,选取合格的mRNA作为模板进行反转录反应,反转录条件严格按照说明书进行操作。PCR引物由北京博爱森生物技术公司合成,GCMl上游：5’-GTTAGAAGCTGAGGCAAGAA-3’,下游：5’-TAAAGATTACCCGCGGAT-3’; HtrA4上游：5’-GTCAGCACCAAACAGCG-3’,下游：5’-GGAGATTCCATCAGTCACCC-3’; β-actin上游：5’-AACTCCATCATGAAGTGAC-3’下游：5’-GATCCACATCTGCTGGAAGG-3’,均按说明操作进行PCR,扩增产物经凝胶电泳后,在D-140图像记录分析系统上进行分析。HtrA4和GCM1的mRNA表达量分别以HtrA4或GCM1扩增DNA条带的灰度值计算。Western blotting:取100mg组织剪碎进行蛋白提取,凝胶电泳,转膜,杂交,显色,成像仪成像,分析结果3.统计学方法：应用SPSS17.0软件包进行统计分析,以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,采用t检验,组间相关性分析用spearman检验。结果在mRNA水平,HtrA4与GCM1在组中均有表达,HtrA4与GCM1mRNA表达量在研究组中低于健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)；子痫前期组胎盘组织中HtrA4与GCM1的表达均呈正相关(mRNA:r-0.426,蛋白：r=0.686、P<0.01)。讨论GCM1与子痫前期发病的关系GCM1即GCMa, GCM蛋白是一种具有保守DNA结合区域的转录因子。人类的GCM1主要在胎盘组织,是胎盘发育过程中一个必要的转录因子。在低氧情况下GCM1泛素化降解而活性被抑制,GCM1主要通过促进金合胞素和PGF进而促进滋养细胞融合分化,而HtrA4可以通过PDZ结构域与合胞素的表面亚结构结合,已有报道HtrA4和GCM1交叉表达于母胎界面的间质EVTs中。我们实验证明了在子痫前期的胎盘中GCM1和HtrA4在基因和蛋白水平均降低,且具有相关性,因此,GCM1有可能通过激活HtrA4的表达来调节EVTs的分化,进而促进EVTs侵袭,并同时抵消合胞素的融合活性,但HtrA家族其他蛋白主要通过PDZ结构进行活化作用,所以,HtrA4也有可能促进合胞素表达,还需要进一步实验研究。结论HtrA4与GCM1在子痫前期胎盘中均表达异常,而且具有相关性,两者在子痫前期发展过程中可能相互作用,有助于进一步了解子痫前期发病机制。