两种检测氧化应激效应物的小分子荧光探针的设计、合成及生物成像研究

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荧光探针在环境监测、疾病诊断、生物成像等领域的应用十分广泛。探针的响应机理主要为其分子结构中的识别基团与被检测物质之间接触后发生结构变化,从而导致探针原有荧光强度发生变化。小分子荧光探针具有高灵敏度、强选择性、低毒性、易操控等优点。随着现代成像技术和成像仪器的迅速发展,它已成为当代重要的化学计量成像工具之一。本论文中,我们设计并合成了探针T和探针OXO-ZX,分别以常见的氧化应激效应物次氯酸盐(Cl O-)和过氧化亚硝酸根(ONOO-)作为被检测对象,通过NMR、质谱确认探针的分子结构,并根据多项体内外活性实验结果验证探针的荧光成像特性。其中,探针T以喹啉醛结构为基础,利用氧化还原机理脱去部分基团导致荧光淬灭。该探针具有高灵敏度,反应迅速等优点,表现在检测限为0.426μM,荧光量子产率用罗丹明染料标定为0.7%,与Cl O-接触后发生即时性荧光减弱,仪器难以检测捕捉中间产物。通过体外抗干扰实验,我们证明了探针T在其它两性离子、氨基酸、蛋白质以及活性氧影响下的抗干扰性强。另外,细胞和植物体的成像实验显示,探针T可以较好的检测内外源Cl O-的浓度变化,应用于植物活体内Cl O-的检测工作。综上,该项研究为拟南芥突变型根部氯酸通道障碍与次氯酸吸收影响的关联性提供了基础性证据。此外,我们设计合成的探针OXO-ZX响应机理与上述探针类似,与被检测物接触引发氧化还原反应,使杂环裂解导致探针原有荧光减弱。体外活性实验结果证明探针OXO-ZX有着良好的稳定性,不受两性离子干扰。探针OXO-ZX荧光强度变化与ONOO-的浓度变化速率比值呈现先慢后快再减缓的趋势。根据标准浓度曲线线性拟合公式算得其检测限为0.64μM。在细胞和植物体成像实验中,探针OXO-ZX表现出极佳的生物适配性,可参与拟南芥根系吸收和根茎部位导管运输过程。我们这种利用小分子荧光探针进行植物体成像的方法为研究植物体内污染物生物累积效应以及营养物质吸收、运输情况提供了新的检测途径。
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