落叶松树皮多酚的提取、纯化及抗氧化活性研究

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落叶松(Larix spp.)是松科中的重要成员之一,被誉为“北方杉木”。我国有丰富的落叶松资源,主要分布在东北及内蒙地区。研究表明,多酚类物质是松科植物体内的重要组成成分,具有护肤美白、抗菌抑菌等生理功能。最大限度地提取落叶松树皮中的多酚活性物质,利用它的抗氧化活性将其应用在食品、护肤品、医疗领域,对人们的健康有其积极的意义。本文以落叶松树皮为主要原料,分别对影响松多酚提取与纯化效果的因素进行单因素实验分析,在此基础上设计三因素三水平的响应面实验优化落叶松多酚的提取与纯化工艺。以OH·DPPH·、O22-、H2O2、ABTS自由基清除率为指标,考察了落叶松多酚粗提液、纯化液的体外抗氧化活性,并将实验结果与Vc的抗氧化性进行比对。简单地研究了多酚纯化物与Ca2+、Zn2+的螯合能力,比较了螯合前后其对OH·与DPPH·自由基的清除能力。最后,对落叶松树皮中多酚的组成与含量进行了分析。落叶松多酚的提取采用有机溶剂浸提辅助超声波法,分别考察试剂种类、温度、试剂浓度、料液比、超声时间六个因素对落叶松树皮多酚提取效果的影响,并在同等条件下测定落叶松球果中多酚含量,比较二者含量的差别。基于单因素实验结果,以树皮为原料,应用响应面实验优化提取工艺,得到落叶松树皮多酚提取工艺的最佳条件:温度57℃、乙醇浓度49.6%、料液比1:30、超声时间20.4min,在此条件下松多酚的提取率为112.28mg/g。对松多酚粗提物采用大孔树脂法进行纯化。以纯化后多酚的回收率、纯度为目标值,分别考察径长比、乙醇浓度、进样浓度、洗脱流速、上样体积和pH六个因素对多酚纯化效果的影响,并通过响应面法对纯化工艺进行优化,考虑到实际操作条件,最终获得的纯化工艺条件为:1:25的径长比、47%的洗脱浓度、2.5mg/mL的上样浓度、5mL/min的洗脱流速、42mL的进样体积,此时多酚纯度的验证值为75.52%。体外抗氧化实验结果表明,落叶松树皮多酚具有较好的清除自由基功能。其中,在清除ABTS自由基方面,松多酚纯化物有显著的清除作用,最高清除率为93.04%,略大于抗坏血酸;在清除H2O2方面松多酚的清除率最低,仅为10.68%,远低于抗坏血酸的清除活性,松多酚纯化物的清除自由基活性依次为:ABTS>OH·>DPPH·>O22->H2O2。松多酚与锌离子的螯合效果优于钙离子,在最佳的单因素实验条件下多酚与锌离子的螯合率达到47.28%,高于多酚—Ca的最优螯合率36.64%。锌螯合物在DPPH·自由基清除方面优于钙螯合物,而在OH·自由基清除方面弱于钙螯合物。
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