【摘 要】
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本研究主要以黒凤鸡、桃源鸡、湘黄鸡以及培育品种湘东鸡为试验素材,对目前鸡精液冷冻保存的两类主要方案,即甘油细管与二甲基乙酰胺(Dimethyl Acetamide,DMA)细管冷冻技术的实用性作出评价,为我国家禽精液冷冻保存库的建立提供技术支撑。取得如下结果:1.两类主要技术对同品种公鸡精液冷冻保存效果的比较三种冷冻保护液方案中,6%DMA组平均冷冻前活力最高,平均可达0.90,极显著高于11%甘
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本研究主要以黒凤鸡、桃源鸡、湘黄鸡以及培育品种湘东鸡为试验素材,对目前鸡精液冷冻保存的两类主要方案,即甘油细管与二甲基乙酰胺(Dimethyl Acetamide,DMA)细管冷冻技术的实用性作出评价,为我国家禽精液冷冻保存库的建立提供技术支撑。取得如下结果:1.两类主要技术对同品种公鸡精液冷冻保存效果的比较三种冷冻保护液方案中,6%DMA组平均冷冻前活力最高,平均可达0.90,极显著高于11%甘油(0.86)与6%甘油组(0.86)(p<0.01),但其冷冻后平均活力最高为11%甘油组,其平均冻后活力可达0.7,平均冻后活力损失为0.16,均极显著性优于6%甘油(0.63、0.27)以及6%DMA(0.51、0.39)(p<0.01),但11%甘油组冻后活力高低却与冻后精液受精率以及孵化率并非一致。6%甘油组平均受精率可达39.68%,极显著性优于6%DMA(17.19%)及11%甘油(14.10%)(p<0.01),且6%甘油组最高批次受精率可达85.71%,远高于6%DMA组(50%)以及11%甘油组(42.86%);6%甘油组其孵化率可达54.16%,极显著高于6%DMA(3.33%)组与11%甘油组(7.14%)(p<0.01)。由上述结果可知,冻后精子活力高低并不一定与受精率高低一致,而影响受精率的关键因素主要在于冷冻保护剂的浓度。2.两种技术对不同品种、个体公鸡冷冻效果的比较当冷冻保护剂为11%甘油,黒凤鸡其平均冷冻前活力为0.86,冷冻后活力为0.70,冻后损失活力则为0.2,均极显著高于桃源鸡(0.77、0.59、0.31),培育品种湘东鸡(0.77、0.59、0.31)以及湘黄鸡冷冻前活力(0.80)(p<0.01)。而湘黄鸡冻后活力(0.64)及冻后活力损失(0.26)与黒凤鸡不存在显著性差异(p>0.05)。当冷冻保护剂为6%DMA时,黒凤鸡冷冻前活力为0.9,极显著性高于其他品种(p<0.01),但其冷冻后活力则为0.51。冻后活力最高的为湘黄鸡与湘冻鸡,其平均冻后活力可达0.55,但与其他品种不存在显著性差异(P<0.05);而当冷冻保护剂为6%甘油,三个品种间冷冻前活力不存在差异,但黑凤鸡冻精解冻后平均活力则为0.51,极显著性优于湘黄鸡与湘东鸡(p<0.01)。当冷冻保护剂为11%甘油时,湘黄鸡、桃源鸡以及黑凤鸡同品种内公鸡精子抗冻性个体差异并不显著(P>0.05),但培育品种湘东鸡则同品种内存在极显著性差异(P<0.01),其解冻后活力最高可达0.77,而最低则为0.45。不同品种精液密度并不存在显著性差异(P>0.05)。由此可推测,精子抗冻性强弱是影响精子冻后活力的关键因素,而自身抗冻性强且品种内个体抗冻性较为稳定的品种,不论使用什么冷冻保护剂,都可获得较高的冻后活力。3.去甘油时离心力及离心时间的筛选采用11%的甘油细管冻精,分别对500g×20min、560g×20min、630g×15min以及700g×10min四组参数进行筛选。630g×15min离心去甘油后冻精活力最高,平均可达0.27,略高于500g×20min(0.24)、560g×20min(0.25)以及700g×10min(0.25),但不存在显著性差异(P>0.05);离心去甘油后冻精活力损失最小的为700g×10min组,其平均为0.17,远低于560g×20min(0.18)、500g×20min(0.28)以及630g×15min(0.23),但与其他三组参数不存在显著性差异(P>0.05);四组离心参数上清中基本无精子数。由以上结果可推测,离心时间越短精子离心时所产生的损失越小,由此可推测离心力的大小并不是影响精子离心后活力的主要因素。由此可知,甘油冷冻技术中,较高的精子冷冻活力并不能获得高受精率。在三种冷冻方案中,6%甘油组的受精率最高,平均可达39.68%,最高批次受精率可达85.71%,平均孵化率可达54.16%;而优化后的去甘油参数可将精子活力损失控制在0.2左右,极大程度上提高了去甘油后精子活力;尽管甘油冷冻保存技术中去甘油操作复杂,但受精率与稳定性都要优于DMA冷冻保存技术,是目前精液冷冻保存技术的首选方案。
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