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神农香菊(Dendranthema indicum var. aromaticum)是菊科菊属中有一种新资源植物,其花、叶及根均具有浓郁的香气,为菊属植物中罕见的具有浓郁香味的种。植物的香味物质通常含有几种化学成分,是由多种酶调节生物合成途径所产生,因此香味成分的含量受相关酶基因的限制。然而,转录因子基因表达的改变通常会导致植物的剧烈变化,MYB基因香味成分的次生代谢物有关。因此,开展神农香菊芳香物质相关代谢相关的基因工程研究对改良重要的观赏植物菊花的花香性状,培育优良的菊花新品种具有十分重要的意义。研究的结果如下：1.本研究以引自湖北神农架的神农香菊幼苗叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增得到一个1300bp的MYB类转录因子基因,将其命名为DiaMYB,利用生物信息学方法对DiaMYB基因编码的氨基酸序列进行分析,结果表明该基因序列全长948bp,开放阅读框编码315个氨基酸,分子量为34.57,等电点为9.04,具有两个MYB结构域,是一个典型的R2R3MYB转录因子。通过NCBI网站的BLAST发现该基因与菊花MYB2基因有着高度同源性(95%),推测其功能也相似,为与激素应答有关。2.构建植物表达载体PCAMBIA1301-MYB,采用农杆菌侵染方法将神农香菊DiaMYB基因的植物表达载体转入拟南芥中,对转基因拟南芥进行潮霉素筛选,共筛选出DiaMYB6个转基因株系,通过对转基因拟南芥进行RT-PCR检测,表明神农香菊DiaMYB基因成功转入拟南芥。3.在显微镜下观察发现,MYB转基因拟南芥的表皮毛数量与野生型拟南芥相比明显的降低。同一视野范围内含有DiaMYB基因的拟南芥表皮毛数量相对较少,选取了10个视野范围进行数量的差异统计分析,表明在转基因拟南芥叶片正面分布着极少数表皮毛,而在背面却没有,这与野生型拟南芥有很大的不同。因此,该现象的产生可能与DiaMYB转录因子基因的过量表达抑制了植株表皮毛形成或者形态建成,进一步说明了DiaMYB基因与表皮毛的形成有关。