【摘 要】
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人参皂苷F2及Rh2组均为稀有人参皂苷,其活性高、吸收率高。本论文主要研究以人参中含量高的Rb1、Rb2、Rc、Rd等人参二醇类皂苷(PPD)为底物,用生物转化法制备稀有人参皂苷Rh2
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人参皂苷F2及Rh2组均为稀有人参皂苷,其活性高、吸收率高。本论文主要研究以人参中含量高的Rb1、Rb2、Rc、Rd等人参二醇类皂苷(PPD)为底物,用生物转化法制备稀有人参皂苷Rh2组,为其工业化生产提供依据。首先,确定用生物转化法制备人参皂苷F2的最适酶反应条件,包括:底物类型、底物浓度、反应时间、温度、pH,最终确定最适酶反应条件为:sp.848菌酶液最适底物为PPD,最适底物浓度为6%,,最适酶反应时间为36 h,最适温度为4(0℃,最适pH为5.0;sp.48菌酶液最适底物为PPD,最适底物浓度为6%,最适酶反应时间为24 h,最适温度为40℃,最适pH为5.0。此条件下,PPD转化为F2的转化率为80%以上。依此结果,用生物转化法大批量制备人参皂苷F2:分别以96 g的PPD为底物,与sp.848菌、sp.48菌的酶液反应,分别得到76.2 g、77.5 g酶反应产物。反应结束,离心回收酶,回收率为60%。将两种菌种的回收酶液混合,与底物PPD在最适条件下反应,结束后,再次回收酶进行反应,两次反应共得到104.0 g酶反应产物。35 g酶反应产物用硅胶柱层析分离,依次用V(氯仿):V(甲醇)=9.0:1.0和V(氯仿):V(甲醇)=8.6:1.4洗脱剂进行洗脱,对F2单点的洗脱液,进行减压浓缩得到人参皂苷F2单体18.2 g,得率为52.0%,经HPLC检测纯度为96.7%。10 g人参皂苷F2用实验室提供的特定酶试剂转化处理,进一步制备人参皂苷Rh2组,用水饱和正丁醇萃取皂苷3次,合并正丁醇相、水洗糖类等杂质3次,减压蒸馏,得到6.1 g产物,经HPLC检测人参皂苷Rh2组在其中所占的比例为90.0%,四种异构体20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3 含量比例为 32.3:31.2:12.0:21.5。
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