IGF2基因内含子miR-483与结直肠癌关系的研究

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目的:本研究通过检测结直肠癌患者的癌组织、癌旁组织的IGF2基因及癌组织、癌旁组织、术前血清和健康对照志愿者血清miR-483-3p、miR-483-5p的相对表达量。比较IGF2基因、miR-483-3p、miR-483-5p在癌与癌旁组织之间的表达差异,评价三者在结直肠癌组织表达水平的相关性和诊断结直肠癌的准确性,并揭示癌组织miR-483-3p、miR-483-5p表达与临床病理特征之间的内在联系。同时,比较miR-483-3p、miR-483-5p在患者血清与正常对照血清之间的表达差异及其在诊断结直肠癌的准确性。探讨IGF2基因内含子上的miR-483作为结直肠癌分子标志物的可能性。方法:收集77例结直肠癌患者的癌组织和相应的癌旁组织样本、55例结直肠癌患者血清样本、31例健康志愿者血清样本并提取总RNA,反转录后应用实时荧光定量PCR法检测直肠癌患者的癌组织、癌旁组织的IGF2基因、miR-483-3p和miR-483-5p及结直肠癌患者术前血清和健康对照志愿者血清miR-483-3p、 miR-483-5p的相对表达量。同时收集结直肠癌患者的临床病理资料。统计分析癌与癌旁组织IGF2基因、miR-483-3p、miR-483-5p表达的差异性及它们三者表达水平的相关性,同时将结直肠癌组织样本miR-483-3p、miR-483-5p的相对表达量与临床病理资料相结合分析其相关性。比较分析结直肠癌患者与健康志愿者血清miR-483-3p、miR-483-5p表达的差异性。构建受试者工作特征曲线(Receiver Operator Characteristic curve, ROC曲线),通过曲线下面积(Area under the ROC curve, AUC)分析组织及血清miR-483-3p、miR-483-5p对结直肠癌的诊断的敏感性(Sensitivity, Sen)和特异性(Specificity, Spe)。结果:结果显示结直肠癌患者的肠癌组织IGF2基因的表达水平明显高于癌旁组织(p<0.05),而结直肠癌组织miR-483-3p及miR-43-5p的表达水平也均显著高于癌旁组织(p均<0.0001)。更重要的是,我们发现结直肠癌组织中miR-483-3p与miR-483-5p的表达水平有明显的相关性(rs=0.5507,p< 0.0001),另外,结直肠癌组织miR-483-3p、miR-483-5p与其宿主基因IGF2表达量也呈明显的相关性(rs=0.4984,p< 0.0001; rs=0.6659,p< 0.0001)。然而,其浓度与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、分化程度和病理分期等临床病理特征均无显著的相关性。ROC曲线分析显示,组织miR-483-3p对结直肠癌的诊断灵敏度和特异度分别为76.62%和62.34%,组织miR-483-5p对结直肠癌诊断的灵敏度和特异度分别为51.95%和84.42%,联合两者诊断结直肠癌的灵敏度可提高到88.76%,特异度为52.62%,它们的最大受试者工作特征曲线ROC曲线下面积分别为0.7333(95%CI:0.6542~0.8125;p<0.0001)、0.7136(95%CI:0.6332~0.7940;p<0.0001)。用ROC曲线分析血清miR-483-3p、miR-483-5p对结直肠癌的诊断价值时,血清miR-483-3p的ROC曲线下面积AUC为0.6012(95%CI:0.4694~0.7329;p=0.1208),当cut off值为2.945时,诊断的敏感性和特异性分别为41.94%和83.64%,而血清miR-483-5p的ROC曲线下面积AUC为0.7120(95% CI:0.6020-0.8220;p=0.0012),当cut off值为22.15时,血清miR-483-5p的诊断结直肠癌的敏感性和特异性分别为80.65%和60%。结论:结直肠癌患者IGF2基因、miR-483-3p、miR-483-5p在结直肠癌组织中的相对表达量均明显高于癌旁正常组织且有明显的统计学差异。结直肠癌组织IGF2基因与miR-483-3p、miR-483-5p表达量呈明显的相关性,而且miR-483-3p、 miR-483-5p的表达量也呈明显的相关性。另外,结直肠癌患者癌组织miR-483-3p、 miR-483-5p浓度与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、分化程度和病理分期均无显著的相关性。结直肠癌患者血清miR-483-5p表达水平明显高于健康对照组,有明显的统计学差异,而血清miR-483-3p的表达水平在结直肠癌患者与健康对照组间无明显的统计学差异。组织miR-483-3p、miR-483-5p及血清miR-483-5p的检测及其应用,均有较大的AUC值,对结直肠癌有较高的诊断价值,这提示组织和血清IGF2基因内含子上的miR-483有望作为结直肠癌的诊断标志物。
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