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目的通过观测高糖环境下,野生型QDPR蛋白含量改变及K93T突变对肾小管上皮细胞系(NRK-52E)BH4代谢通路相关酶(DHFR、TPH1、TH、PAH)的影响,探讨QDPR蛋白在DN的发生、发展中可能的作用机制。方法免疫组化方法检测DHFR、PAH、TPH1和TH在糖尿病肾病大鼠模型肾皮质的表达情况。制作过表达野生型、K93T突变及敲低QDPR基因的慢病毒。利用制备的慢病毒感染NRK-52E细胞,分别制作过表达、低表达野生型QDPR蛋白及过表达K93T突变QDPR蛋白细胞模型,并用Western blot、Real-time PCR验证QDPR表达情况。NRK-52E细胞,过表达、低表达野生型及K93T突变QDPR蛋白细胞模型分别给予5.4mmol/L正常糖培养基和30mmol/L高糖培养基培养细胞72小时。实验采取如下分组:(1)NRK-52E对照组(NC组)(2)NRK-52E高糖组(NHG组)(3)空载过表达病毒对照组(LV-OCON组)(4)空载过表达病毒高糖组(LV-OCON-HG组)(5)QDPR蛋白过表达组(LV-QDPR组)(6)QDPR蛋白过表达高糖组(LV-QDPR-HG组)(7)QDPR蛋白K93T突变组(K93T-QDPR组)(8)QDPR蛋白K93T突变高糖组(K93T-QDPR-HG组)(9)敲低随机序列对照组(LV-SHCON组)(10)敲低随机序列高糖组(LV-SHCONHG组)(11)QDPR蛋白敲低组(LV-SHQDPR组)(12)QDPR蛋白敲低高糖组(LV-SHQDPR-HG组)。Western blot法检测高糖环境下QDPR蛋白含量改变及K93T突变对NRK-52E细胞BH4代谢通路相关酶DHFR、TH、TPH1、PAH含量影响,探讨QDPR蛋白在DN发生发展的作用机制。结果1 DHFR、TPH1和PAH在糖尿病肾病大鼠模型肾小管中表达,TH不表达。2高糖环境下NRK-52E细胞NHG组DHFR、TPH1、PAH蛋白表达含量低于正常糖环境NC组(P<0.05),TH蛋白在NRK-52E细胞中不表达。3高糖环境,过表达QDPR蛋白LV-QDPR-HG组与空载过表达病毒LV-OCON-HG组相比,DHFR表达含量显著降低(P<0.001)、TPH1表达含量降低(P<0.05)、PAH表达含量明显降低(P<0.01),而TH蛋白在QDPR蛋白过表达NRK-52E细胞中不表达。4无论是正常糖环境(5.4mmo L/L)还是高糖环境(30mmo L/L),与敲低随机序列对照LV-SHCON组相比,敲低QDPR蛋白LVSHQDPR组DHFR、TPH1、PAH蛋白表达差异无统计学意义,而TH蛋白在敲低QDPR蛋白NRK-52E细胞中不表达。5高糖环境,与QDPR蛋白过表达LV-QDPR-HG组相比,QDPR蛋白K93T突变K93T-QDPR-HG组DHFR表达含量增加(P<0.05)、TPH1表达含量明显增加(P<0.01)、PAH表达含量增加(P<0.05),TH蛋白在QDPR蛋白K93T突变的NRK-52E细胞中不表达。结论1高糖环境下肾小管上皮细胞系NRK-52E细胞DHFR、TPH1和PAH蛋白表达含量降低,提示DHFR、TPH1和PAH可能在DN的发生发展中起重要作用。2高糖环境下,QDPR蛋白含量改变及K93T突变能影响NRK-52E细胞BH4代谢通路相关酶DHFR、TPH1、PAH表达含量,提示QDPR基因可能通过调控其代谢通路相关酶影响DN的发生、发展。