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第一部分硼替佐米对K562细胞株NF-κB及ICAM-1表达的影响目的研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib,Bor)对白血病K562细胞核因子κB(NF-κB)及细胞间粘附分子ICAM-1(intercellular adhesionmolecule-1)表达的影响,为其靶向治疗急性白血病提供依据。方法用含10%小牛血清的RPMI1640培养液体外培养K562细胞,分别用0、10、20、30、50、100nM的蛋白酶体抑制剂硼替佐米干预K562细胞6h后收集。采用SP免疫组化法测各组细胞的NF-κB活性;采用RT-PCR(reverse transcription-PCR)法分析各处理组K562细胞ICAM-1在mRNA水平表达的变化。结果1.SP免疫组化法检测细胞NF-κB活性变化结果:对照组(硼替佐米0nM)K562细胞的NF-κB阳性率为95.00±2.00%,积290.33±20.50分;不同浓度(10,20,30,50,100nM)硼替佐米处理组,NF-κB阳性率分别为84.67±3.51%、77.33±2.52%、66.67±4.16%、58.33±7.64%、48.67±3.21%,较对照组均有明显下降(P＜0.05),各组积分值较对照组均有明显下降(P＜0.05)。2.RT-PCR法测定细胞ICAM-1 mRNA表达的变化:对照组荧光灰度ICAM-1/GAPDH比值为0.7198±0.0562;各药物处理组荧光灰度比值分别为0.5795±0.0282、0.4305±0.0608、0.3570±0.0342、0.3120±0.0501、0.3190±0.0333,各药物处理组ICAM-1的表达量较对照组均有明显下降(P＜0.01)。3.NF-κB活性与ICAM-1表达影响的相关性分析:各药物处理组NF-κB阳性率与ICAM-1表达成正相关(r值为0.8928)。结论硼替佐米明显抑制K562细胞NF-κB的活性及ICAM-1的表达。二者成正相关。硼替佐米可能通过抑制NF-κB的活性,下调细胞间粘附分子ICAM-1的表达,为白血病靶向治疗提供了一个新的途径。第二部分硼替佐米与阿糖胞苷体外作用K562细胞的实验研究目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bor)单独或联合阿糖胞苷(Ara-c)对髓系白血病K562细胞株生长抑制率、凋亡率的影响,并分析可能的作用机制。方法以20nM的Bor、0.2ug/ml的Ara-c分别单独处理以及不同序贯方式联合处理K562细胞48h后,MTT法检测比较细胞生长抑制率;流式细胞术检测比较细胞凋亡率的差异。并在两药分别单独处理6h后SP免疫组化法分析细胞NF-κB活性及流式细胞术检测细胞周期的变化。结果1.各联合用药组细胞生长抑制率与细胞凋亡率均高于两药分别单独处理组(P＜0.05),且在各联合用药组中,C组(先加入Ara-C预处理6h后序贯Bor组)细胞生长抑制率与细胞凋亡率分别为81.54±3.95%与29.17±3.1%,均高于其它各组(P＜0.05)。2.Bor单独处理细胞6h,细胞NF-κB活性减低,细胞周期阻滞于G2/M期;Ara-C单独处理细胞6h,NF-κB活性增高,G1期细胞明显增多。结论硼替佐米可有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡;与Ara-C联合,这种效应显著增强,尤以Ara-C预处理后序贯Bor组影响最大.Ara-C预处理后,对NF-κB及细胞周期的影响可能是发挥更大协同效应的原因。