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目的:
观察化痰方药组与活血方药组对AS小鼠主动脉斑块面积和病理情况的影响;对小鼠血清血脂四项:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量的影响;对小鼠主动脉sGAGs以及其中CSPG含量的作用;对小鼠主动脉硫酸软骨素合成酶以及分解酶蛋白和mRNA表达水平的影响;对小鼠主动脉炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)蛋白和mRNA水平的影响。
方法:
采用油红0染色测定二陈汤合瓜蒌薤白半夏汤组与血府逐瘀汤组(以下简称化痰组与活血组)对AS模型小鼠整体主动脉及主动脉瓣脂质斑块面积占比的影响;采用HE染色检测两给药组对小鼠主动脉病理情况的作用;试剂盒检测两给药组对AS小鼠血清血@lXt项的影响;B1yscan试剂盒检测两给药组对AS小鼠主动脉GAG含量的影响;免疫荧光法检测两给药组对As小鼠主动脉CSPG含量的影响;采用Western Blot和Real-Time PCR检测两给药组对AS小鼠主动脉软骨素合成酶1(CHSY-1)、软骨素聚合因子(CHPF)、软骨素4-0-磺基转移酶-1(C4ST-1)、透明质酸酶1(HYAL-1)、N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸盐硫酸酯酶(GALNS)蛋白水平和mRNA水平的变化;采用Western Blot和Real-Time PCR检测两给药组对As小鼠主动脉TNF-a和IL-6蛋白水平与mRNA水平的变化。
结果:
1、主动脉瓣油红0染色结果表明，与模型组相比，两给药组均减少主动脉瓣处斑块面积。按α=0.05水准，正常组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义;化痰组与模型组(P=0.046)差异有统计学意义，活血组与模型组差别无统计学意义(P=1.000)。
2、主动脉整体油红0染色结果表明，与模型组相比，两给药组均减少主动脉斑块面积。按α=0.05水准，化痰组与模型组(P=0.016)差异有统计学意义，活血组与模型组差别无统计学意义(P=0.272)。
3、HE染色结果显示，两给药组均在一定程度上减轻主动脉病理表现，减少脂质斑块，改善炎性浸润，化痰组效果更为显著。
4、血清血脂检测结果显示，与模型组相比，两给药组均减轻小鼠高脂血症。按α=0.05水准，在TC中，正常对照组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.004)差异有统计学意义。在TG中，正常对照组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.010)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.037)差异有统计学意义。在LDL中，正常对照组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.014)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.151)差异无统计学意义。在HDL中，正常对照组与模型组(P=0.002)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.037)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.314)差异无统计学意义。
5、主动脉sGAGs检测结果显示，与模型组相比，化痰组显著减少主动脉GAG的含量，活血组均在一定程度上有所减少。按α=0.05水准，正常对照组与模型组(P=0.007)差异有统计学意义;化痰组与模型组(P=0.014)差异有统计学意义;活血组与模型组(P=0.107)差别无统计学意义。
6、主动脉CSPG免疫荧光染色结果显示，与模型组相比，两给药组CSPG主动脉表达均减少。按α=0.05水准，正常对照组与模型组(P＜0.001)差异具有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.002)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.105)差别无统计学意义。
7、western Blot检测主动脉CS合成分解酶蛋白表达水平，结果显示，与模型组相比，两给药组显著减少主动脉CS合成酶CHSY-1、CHPF、C4ST-1的表达，按α=0.05水准，在CHSY-1中，正常组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.001)差异有统计学意义;在CHPF中，正常组与模型组(P=0.018)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.010)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.016)差异有统计学意义;在C4ST-1中，正常组与模型组(P=0.020)差异有统计学意义，化痰组与模型组比(P=0.006)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.020)差异有统计学意义。
CS分解酶的结果显示，与正常组比较，模型组与两给药组HYAL-1、GALNS表达均增高，与模型组相比，化痰组HYAL-1、GALNS表达增高，活血组无明显变化，按α=0.05水准，在HYAL-1中，正常组与模型组(P=0.047)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.487)差异无统计学意义，活血组与模型组(P=0.956)差异无统计学意义:在GALNS中，正常组与模型组(P=0.047)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.050)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=1.000)差异无统计学意义。
8、Real-TimePCR检测动脉CS合成分解酶mRNA表达水平，结果显示，与模型组相比，化痰组显著减少主动脉CS合成酶CHSY-1、CHPF、C4ST-1mRNA的表达，活血组有一定的下降趋势，按α=0.05水准，在CHSY-1中，正常组与模型组(P=0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.005)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.089)差异无统计学意义;在CHPF中，正常组与模型组(P=0.024)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.047)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.924)差异有统计学意义;在C4ST-1中，正常组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组比(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义。
CS分解酶的结果显示，与正常组比较，模型组与两给药组HYAL-1、GALNS mRNA表达均增高，与模型组比较，化痰组HYAL-1、GALNS mRNA表达增高，活血组无明显变化。按α=0.05水准，在HYAL-1中，正常组与模型组(P=0.009)差异有统计学意义，化痰组与模型组相比(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=1.000)差异无统计学意义;在GALNS中，正常组与模型组(P=0.002)差异有统计学意义化痰组与模型组比(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.972)差异无统计学意义。
9、Western Blot检测主动脉TNF-α、IL-6蛋白表达水平，结果显示，与模型组相比，两给药组均减少TNF-Q、IL-6的表达。按α=0.05水准，在TNF-α中，正常组与模型组比较(P=0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.011)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.009)差异有统计学意义;在IL-6中，正常组与模型组比较(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.038)差异有统计学意义。
10、Real-Time PCR检测主动脉TNF-α、IL-6mRNA表达水平，结果显示，与模型组相比，两给药组均减少TNF-α的表达，化痰组减少IL-6的表达，活血组对IL-6无显著影响。按α=0.05水准，在TNF-a中，正常组与模型组比较(P=0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.003)差异有统计学意义;在IL-6中，正常组与模型组比较(P=0.006)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.109)差异无统计学意义，活血组与模型组(P=0.970)差异无统计学意义。
结论:
化痰组与活血组均可减轻AS小鼠主动脉斑块面积，改善小鼠高脂血症，减少小鼠主动脉sGAGs、CSPG含量，减少主动脉CS合成酶和炎症因子的表达，并且整体表现以化痰组效果更优，化痰组还可升高CS分解酶的表达，而活血组对此无太大影响。化痰组对AS小鼠较好的治疗作用表明“痰”是AS病理过程中主要的原因之一，化痰治法可有效改善AS病变，并且GAG与“痰”密切相关，化痰组减少主动脉GAG的作用可能是通过减少GAG的产生，加速GAG的分解来实现的，并减少炎症因子在动脉壁的潴留。
观察化痰方药组与活血方药组对AS小鼠主动脉斑块面积和病理情况的影响;对小鼠血清血脂四项:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量的影响;对小鼠主动脉sGAGs以及其中CSPG含量的作用;对小鼠主动脉硫酸软骨素合成酶以及分解酶蛋白和mRNA表达水平的影响;对小鼠主动脉炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)蛋白和mRNA水平的影响。
方法:
采用油红0染色测定二陈汤合瓜蒌薤白半夏汤组与血府逐瘀汤组(以下简称化痰组与活血组)对AS模型小鼠整体主动脉及主动脉瓣脂质斑块面积占比的影响;采用HE染色检测两给药组对小鼠主动脉病理情况的作用;试剂盒检测两给药组对AS小鼠血清血@lXt项的影响;B1yscan试剂盒检测两给药组对AS小鼠主动脉GAG含量的影响;免疫荧光法检测两给药组对As小鼠主动脉CSPG含量的影响;采用Western Blot和Real-Time PCR检测两给药组对AS小鼠主动脉软骨素合成酶1(CHSY-1)、软骨素聚合因子(CHPF)、软骨素4-0-磺基转移酶-1(C4ST-1)、透明质酸酶1(HYAL-1)、N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸盐硫酸酯酶(GALNS)蛋白水平和mRNA水平的变化;采用Western Blot和Real-Time PCR检测两给药组对As小鼠主动脉TNF-a和IL-6蛋白水平与mRNA水平的变化。
结果:
1、主动脉瓣油红0染色结果表明，与模型组相比，两给药组均减少主动脉瓣处斑块面积。按α=0.05水准，正常组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义;化痰组与模型组(P=0.046)差异有统计学意义，活血组与模型组差别无统计学意义(P=1.000)。
2、主动脉整体油红0染色结果表明，与模型组相比，两给药组均减少主动脉斑块面积。按α=0.05水准，化痰组与模型组(P=0.016)差异有统计学意义，活血组与模型组差别无统计学意义(P=0.272)。
3、HE染色结果显示，两给药组均在一定程度上减轻主动脉病理表现，减少脂质斑块，改善炎性浸润，化痰组效果更为显著。
4、血清血脂检测结果显示，与模型组相比，两给药组均减轻小鼠高脂血症。按α=0.05水准，在TC中，正常对照组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.004)差异有统计学意义。在TG中，正常对照组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.010)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.037)差异有统计学意义。在LDL中，正常对照组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.014)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.151)差异无统计学意义。在HDL中，正常对照组与模型组(P=0.002)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.037)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.314)差异无统计学意义。
5、主动脉sGAGs检测结果显示，与模型组相比，化痰组显著减少主动脉GAG的含量，活血组均在一定程度上有所减少。按α=0.05水准，正常对照组与模型组(P=0.007)差异有统计学意义;化痰组与模型组(P=0.014)差异有统计学意义;活血组与模型组(P=0.107)差别无统计学意义。
6、主动脉CSPG免疫荧光染色结果显示，与模型组相比，两给药组CSPG主动脉表达均减少。按α=0.05水准，正常对照组与模型组(P＜0.001)差异具有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.002)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.105)差别无统计学意义。
7、western Blot检测主动脉CS合成分解酶蛋白表达水平，结果显示，与模型组相比，两给药组显著减少主动脉CS合成酶CHSY-1、CHPF、C4ST-1的表达，按α=0.05水准，在CHSY-1中，正常组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.001)差异有统计学意义;在CHPF中，正常组与模型组(P=0.018)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.010)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.016)差异有统计学意义;在C4ST-1中，正常组与模型组(P=0.020)差异有统计学意义，化痰组与模型组比(P=0.006)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.020)差异有统计学意义。
CS分解酶的结果显示，与正常组比较，模型组与两给药组HYAL-1、GALNS表达均增高，与模型组相比，化痰组HYAL-1、GALNS表达增高，活血组无明显变化，按α=0.05水准，在HYAL-1中，正常组与模型组(P=0.047)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.487)差异无统计学意义，活血组与模型组(P=0.956)差异无统计学意义:在GALNS中，正常组与模型组(P=0.047)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.050)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=1.000)差异无统计学意义。
8、Real-TimePCR检测动脉CS合成分解酶mRNA表达水平，结果显示，与模型组相比，化痰组显著减少主动脉CS合成酶CHSY-1、CHPF、C4ST-1mRNA的表达，活血组有一定的下降趋势，按α=0.05水准，在CHSY-1中，正常组与模型组(P=0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.005)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.089)差异无统计学意义;在CHPF中，正常组与模型组(P=0.024)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.047)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.924)差异有统计学意义;在C4ST-1中，正常组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组比(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义。
CS分解酶的结果显示，与正常组比较，模型组与两给药组HYAL-1、GALNS mRNA表达均增高，与模型组比较，化痰组HYAL-1、GALNS mRNA表达增高，活血组无明显变化。按α=0.05水准，在HYAL-1中，正常组与模型组(P=0.009)差异有统计学意义，化痰组与模型组相比(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=1.000)差异无统计学意义;在GALNS中，正常组与模型组(P=0.002)差异有统计学意义化痰组与模型组比(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.972)差异无统计学意义。
9、Western Blot检测主动脉TNF-α、IL-6蛋白表达水平，结果显示，与模型组相比，两给药组均减少TNF-Q、IL-6的表达。按α=0.05水准，在TNF-α中，正常组与模型组比较(P=0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.011)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.009)差异有统计学意义;在IL-6中，正常组与模型组比较(P＜0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P＜0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.038)差异有统计学意义。
10、Real-Time PCR检测主动脉TNF-α、IL-6mRNA表达水平，结果显示，与模型组相比，两给药组均减少TNF-α的表达，化痰组减少IL-6的表达，活血组对IL-6无显著影响。按α=0.05水准，在TNF-a中，正常组与模型组比较(P=0.001)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.001)差异有统计学意义，活血组与模型组(P=0.003)差异有统计学意义;在IL-6中，正常组与模型组比较(P=0.006)差异有统计学意义，化痰组与模型组(P=0.109)差异无统计学意义，活血组与模型组(P=0.970)差异无统计学意义。
结论:
化痰组与活血组均可减轻AS小鼠主动脉斑块面积，改善小鼠高脂血症，减少小鼠主动脉sGAGs、CSPG含量，减少主动脉CS合成酶和炎症因子的表达，并且整体表现以化痰组效果更优，化痰组还可升高CS分解酶的表达，而活血组对此无太大影响。化痰组对AS小鼠较好的治疗作用表明“痰”是AS病理过程中主要的原因之一，化痰治法可有效改善AS病变，并且GAG与“痰”密切相关，化痰组减少主动脉GAG的作用可能是通过减少GAG的产生，加速GAG的分解来实现的，并减少炎症因子在动脉壁的潴留。