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目的哺乳动物的大脑皮层是神经系统中最复杂的结构,负责执行最复杂的神经活动。大脑皮层神经前体细胞遵循严格的发育时间表进行增殖和分化,其所产生的投射神经元、中间神经元以及神经胶质细胞迁移到特定的部位形成特异六层结构,构成大脑皮层功能实现的结构基础。在大脑皮层神经元的发育中,神经前体细胞的增殖、分化和迁移受到很多蛋白因子的调控,若其中任何一个环节出现错误都可能会导致精神分裂症、自闭症和阿尔茨海默病等神经系统疾病。c-myc基因是一种癌基因,是myc家族成员之一,被证明参与调节细胞的增殖、生长、分化、凋亡等基础生理过程。有研究发现在小鼠妊娠期敲除c-myc基因,会出现胚胎死亡的现象。这一现象说明了c-myc在小鼠的器官形成中发挥了重要的作用。而且,有文献报道,前脑内特异性敲除c-myc基因,神经前体细胞的自我更新能力显著降低,说明了c-myc基因参与了前脑神经前体细胞的增殖过程。但是,c-myc基因对大脑皮层神经元的发育有什么作用还不清楚,所以本文中,我们通过探究c-myc基因在大脑皮层神经前体细胞的增殖、神经元的分化及迁移过程中的作用分析c-myc对大脑皮层神经元发育的影响。方法1.我们通过体外电转染技术将特异性的si RNA或c-myc质粒电转入CAD细胞或离体培养的14.5天小鼠胚胎的大脑皮层神经前体细胞中,培养三天后,利用western bolt验证si RNA及质粒的干扰和过表达效率。2.我们运用子宫内电转的方法,将c-myc的特异性si RNA或p EX-4-c-myc过表达质粒电转入14.5天的小鼠胚胎的侧脑室神经前体细胞内,特异性的敲除或过表达胚胎大脑皮层神经细胞内的c-myc基因。3.子宫内电转si RNA或过表达质粒四天后,我们用1%的戊巴比妥钠溶液麻醉孕鼠,取出电转了si RNA或过表达质粒的胚胎小鼠的大脑。我们将取出的一部分胎鼠用于检测si RNA的干扰效率和质粒的过表达效率;另一部分胎鼠则经过固定、脱水处理后,使用冰冻切片机获取14μm厚的大脑皮层切片。4.我们通过对大脑皮层切片进行免疫荧光染色,统计、分析大脑皮层不同层面Brd U/GFP、Tbr2/GFP、Cux1/GFP、βⅢ-tubulin/GFP双阳性细胞占切片组织中GFP阳性细胞的百分比来探究c-myc基因对大脑皮层神经前体细胞增殖、分化及迁移的影响。结果1.c-myc在大脑皮层中有表达,而且通过子宫内电转的方法向E14.5天的小鼠胚胎的侧脑室电转特异性的c-myc si RNA或p EX-4-c-myc过表达质粒,大脑皮层中c-myc的表达水平相应降低或升高。2.通过子宫内电转干扰胚胎大脑皮层中的c-myc基因的表达后,皮层中Brd U/GFP、Tbr2/GFP双阳性细胞占切片组织中GFP阳性细胞的百分比降低,Cux1/GFP、βⅢ-tubulin/GFP双阳性细胞占切片组织中GFP阳性细胞的百分比升高。3.通过子宫内电转过表达大脑皮层中的c-myc基因,皮层中Brd U/GFP、Tbr2/GFP双阳性细胞占切片组织中GFP阳性细胞的百分比升高,Cux1/GFP、βⅢ-tubulin/GFP双阳性细胞占切片组织中GFP阳性细胞的百分比降低。结论大脑皮层神经前体细胞中有c-myc基因的表达。抑制大脑皮层中c-myc基因的表达,可以发现VZ区神经前体细胞的增殖及放射状神经胶质细胞向SVZ区中间前体细胞的转化受到抑制,神经前体细胞向CP区神经元的分化被促进;而过表达大脑皮层中的c-myc基因则能够促进VZ区神经前体细胞的增殖和放射状神经胶质细胞向SVZ区中间前体细胞的转化,抑制神经前体细胞向CP区神经元的分化。综合以上实验结果,我们可以得知,c-myc能够调控大脑皮层神经元的发育。