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目的：对用骨髓间充质干细胞（BMSCs）细胞片层包裹成丝素蛋白(Silk fibroin,SF)/壳聚糖(chitosan,CS)/诱导后BMSCs的三维支架形成的复合体进行观察和检测，并讨论该复合体的成骨效果。方法：密度梯度离心法分离培养兔骨髓间充质干细胞,向成骨细胞方向诱导分化后,接种至温度反应性培养皿中,37℃、5%饱和湿度培养,然后降温至20℃制备细胞片层。将制备好的BMSCs细胞片层与SF-CS/诱导后BMSCs生物支架构建成复合体。将实验分为A、B组，A组为BMSCs细胞片层/SF-CS/诱导后BMSCs生物支架构建成的复合体，B组为SF-CS/诱导后BMSCs生物支架，将2组放置于培养皿中，于37℃、5%饱和湿度体外培养，于3、8、14天取材，进行碱性磷酸酶活性定量、扫描电镜等检测。结果：成功构建了BMSCs细胞片层，BMSCs细胞片层/SF-CS/诱导后BMSCs生物支架复合体。碱性磷酸酶定量A组高于B组，ELLSA测定骨钙素A组高于B组，两组有显著差异性（P﹤0.05），扫描电镜检查见基质中矿化结节A组多于B组。结论：BMSCs细胞片层与SF-CS/诱导后BMSCs生物支架的复合体成骨效果优于SF-CS/诱导后BMSCs生物支架，此类复合体有望成为更好的组织工程骨。