嗜热脱氮芽孢杆菌NG80-2木聚糖酶基因和木糖苷酶基因的克隆、表达与功能鉴定

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dfjixie2010
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木聚糖是植物中半纤维素的主要组成部分,其主链由木糖残基经β-1,4糖苷键连接而成,其侧链由乙酰基,甲基葡糖醛酸基和阿拉伯呋喃糖苷基组成。因为木糖结构复杂,其完全降解需要几种酶共同作用。其中β-1,4木聚糖酶和β-木糖苷酶是最主要的酶在木聚糖快速水解为单糖的过程中起着关键的作用。β-1,4木聚糖酶(EC3.2.1.8,以下简称为木聚糖酶)将木聚糖的主链随机降解为寡聚糖,β-木糖苷酶(EC3.2.1.37,以下简称为木糖苷酶)将寡聚糖降解为木糖。   木聚糖酶和木糖苷酶主要由微生物产生,但是有些植物,海藻,原生动物,甲壳类,昆虫和蜗牛也能产生。由于这两种酶能彻底降解木聚糖,它们在面包制备,淀粉分离,动物饲料,纸浆漂白等工业有很大的用途。   嗜热脱氮芽孢杆菌(Geobacillus thermodenitrificans)NG80-2是从中国北方大港油田分离得到的一株的嗜热菌(最适生长温度65℃),能够以长链烷烃(C15-C36)为唯一碳源。最近,本实验室对NG80-2全基因组的测序工作已经完成,经过前期的研究发现在NG80-2的基因组中存在两种编码木聚糖酶的基因(xynA1和xynA2)和三种编码木糖苷酶的基因(xynB1、xynB2和xynB3)。   本课题将xynA1、xynB1、xynB2和xynB3四种酶基因在Escherichia coli.中进行克隆,将xynA1、xynA2、xynB1、xynB2和xynB3五种基因在Escherichia coli.中进行表达,产物以His-标签融合蛋白的形式纯化。对重组蛋白的活性进行了测定,结果表明这些重组蛋白在65℃均具有活性,具有很大的工业应用前景。
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