研究背景:肝脏一人体最大的脏器,具有解毒、代谢、分泌胆汁、免疫防御、储存肝糖原以及合成分泌性蛋白质等等生理功能。肝脏一旦出现问题,代谢和清除毒素的能力等出现障碍,将演变为肝炎、中毒性肝炎、肝癌或肝硬化等疾病。防治肝损伤是临床肝病治疗的主要环节之一,及时控制肝损伤的发生和发展对治疗肝病将有重要的临床意义。目前临床上对肝病的控制多用西药如联苯双酯等,虽有一定作用,但其肝肾毒性,造成心血管疾病等不良反应限制了临床应用。而某些中药具有抗氧化,清除自由基,抑制炎症因子产生,减少肝脏损伤,促进肝脏细胞再生等作用,可安全有效的保护肝脏功能,降低肝病的产生,如丹参、柴胡、杞子可保护肝脏,并加强肝脏功能,棉茵陈则能够起清肝去黄控制肝病产生。因此中药防治肝病具有巨大的潜力和作用,有重要的临床意义。蒲葵子Eruc tus Livistonae为棕榈科蒲葵树 Livistona chinensisR.Br.的种子[1]。其味苦,性寒,有小毒,有抗癌、凉血止血、止痛的作用,主产于两广、福建和台湾等地[2],民间广泛用于治疗肝炎及食道癌、鼻咽癌、恶性葡萄胎、白血病、绒毛膜上皮癌、肺癌等[3]。文献报道蒲葵子的水提物、乙醇提取物和醋酸乙酯提取物均有一定的抗氧化活性,特别是蒲葵子黄酮部分[3-4]。在南方蒲葵子常用来治疗肝炎,但具体作用及机制尚不明确。本课题组前期研究发现蒲葵子总黄酮(TFFL)具有清除自由基、抗氧化等活性[4]。本实验在前期研究基础上考察TFFL对氧化损伤肝细胞的保护作用,探究其保肝机制。目的:通过体内、体外实验,研究蒲葵子中总黄酮(total flavonoids of EructusLivistonae,TFFL;保肝作用,初步探究其可能的作用机制。方法:通过乙醇提取,大孔树脂吸附,聚酰胺柱分离纯化技术从蒲葵子中富集总黄酮;CCK8法测定TFFL对LO2肝细胞活力的影响以及TFFL对醋氨酚(Acetaminophen,APAP)诱导的LO2细胞的存活率影响;检测LO2细胞中丙二醛(MDA)、丙氨酸转氨酶(ALT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷草转氨酶(AST)、一氧化氮合酶(INOS),超养化物歧化酶(SOD)含量;Western Blot法测定L02细胞中Bc12、Bax蛋白的表达。将雄性6～8周龄的BABL/C小鼠连续灌服10天蒲葵子预防给药后,一次性腹腔注射醋氨酚,诱导小鼠急性肝损伤模型。12小时后测定血清中AST、ALT含量;检测肝脏组织匀浆中MDA、GSH、SOD含量的变化;观察小鼠肝脏的组织学和形态学变化;测定肝脏中炎症因子IL-I β3、TNF-α、IL-6的含量变化;Western Blot法测定肝脏中硝基酪氨酸(NT)、诱导型INOS、Nrf2、HO-1、Bax、Bcl2蛋白的表达。结果:TFFL对人正常肝细胞L02的细胞增值率影响的体外实验表明对正常肝细胞L02的细胞增值率无明显变化,而TFFL在给定的浓度(5～2000 μ g·mL-1)下可促进L02增殖。TFFL对APAP诱导L02细胞损伤的体外实验表明,对APAP诱导的细胞损伤,TFFL预防给药能够减少L02细胞凋亡;且蒲葵子总黄酮预防给药能使细胞中ALT、AST、MDA含量降低,可升高细胞中的GSH、SOD的含量;Western Blot测定中:与正常对照组相比,模型组中Bax蛋白的表达明显升高,Bc12蛋白的表达下降;与模型组相比,各给药组中的Bax蛋白表达下降,且与剂量成依赖性,而给药组中的Bc12蛋白表达升高。对APAP诱导BABL/C小鼠急性肝损伤实验中,蒲葵子预防给药10天后,小鼠血清中的ALT和AST水平降低,肝脏匀浆中的GSH、SOD表达水平升高,MDA、IN0S表达水平下降,炎性因子IL-β、TNF-α、IL-6降低,减轻APAP诱导的小鼠的肝脏组织、形态伤害;Western Blot测定中:小鼠肝脏各TFFL给药组中的INOS、NT、Bax蛋白表达水平下降,且与剂量成依赖性,TFFL各给药组中的Nrf2、HO-1、Bc12蛋白表达水平升高。结论:TFFL对APAP诱导的肝损伤有保护作用,其机理可能与抑制炎症因子,氧化应激和硝化应激有关。