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夏枯草注射液在临床上用于治疗结肠癌,同时也提示其有抑制结肠癌转移的可能性。课题组前期研究通过对夏枯草注射液的提取分离,结合药效实验,筛选出抗结肠癌的活性组分,并在此基础上明确了抗结肠癌及转移的有效组分。
本研究在前期基础上,对夏枯草活性组分的化学成分进行分离、纯化、结构鉴定,并结合药效学研究明确有效成分;建立药材和活性组分中有效成分含量测定的方法;优化活性组分的制备工艺。
对留样活性组分水溶液、注射液稳定性采用HPLC方法进行初步研究,结果表明其化学成分发生变化,确立以夏枯草药材为本研究起点重新制备活性组分样品,并将活性组分冷冻干燥保存,同时对冻干粉的吸湿性研究中,发现其极易吸湿的特性。
对夏枯草活性组分采用制备薄层、硅胶吸附柱层析的方法进行分离纯化,得到两个化合物,运用LC-MS-MS、NMR、X-射线粉末衍射、MS光谱分析技术鉴定为迷迭香酸和甲酸钠;对所分离成分进行细胞增值抑制及转移抑制活性筛选和体内药效学研究,结果表明迷迭香酸有极其显著的抗肿瘤及转移作用,为有效成分。
建立夏枯草药材和活性组分中迷迭香酸HPLC含量测定的方法。色谱条件:色谱柱:C18柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%甲酸(45:55);流速:1.0ml/min;检测波长λ:330nm;柱温:25℃。经方法学考察本法稳定、可靠、重复性好。
在夏枯草注射液制备工艺基础上,以迷迭香酸和干膏率为指标对活性组分制备工艺进行优化考察,确立了由夏枯草药材先水煎醇沉,然后调PH值、再活性炭脱色、最后通过系统溶剂萃取制备活性组分的工艺。