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目的:利用亲和层析法从腹水中纯化抗人血小板糖蛋白Ⅲa(GPⅢa)单克隆抗体(McAb)SZ-21,以2-亚氨噻吩盐酸盐(2-IT)修饰法进行放射性核素99Tcm标记,并探讨99mTc-SZ-21在兔股动脉血栓模型放免显像中的应用价值。方法:(1)SZ-21的分离与纯化以人血小板包板,间接ELISA法筛选高效价的抗血小板GPⅢa单抗SZ-21腹水。采用蛋白G亲和层析分离纯化抗体,透析后以30%的聚乙二醇(PEG20000)进行浓缩,紫外分光光度法定量。(2)SZ-21的活性鉴定采用SDS-PAGE电泳进行抗体纯度及分子量鉴定。分别以人和兔的血小板提供GPⅢa抗原,异硫氰酸荧光素标记的羊抗鼠抗体(FITC-GAM)为检测二抗,小鼠IgG为阴性对照,流式细胞仪(FCM)确定SZ-21与血小板的结合能力。(3)99Tcm标记SZ-21将分离纯化获得的SZ-21用2-IT法修饰后进行99Tcm标记,并对99Tcm-SZ-21的标记率和稳定性进行测定。(4)动物血栓模型的制备取6只新西兰大白兔,雌雄不论,体重1.8～2.7kg,5只于右侧股动脉植入自制的单股螺旋铜丝支架,1只于右侧胫动脉植入。拍摄X线片以确定支架位置。(5)血栓放射免疫显像5只实验兔经耳缘静脉注射99Tcm-SZ-21后进行显像,1只实验兔注入99Tcm-GH作为阴性对照,在30min～3h内的不同时间点进行SPECT平面显像,观察血栓部位放射性分布,勾划血栓部位及临近肌肉组织及对侧股动脉感兴趣区(ROI),计算血栓与周围肌肉组织(T/M)和血栓与对侧血管(T/B)ROI比值。(6)99Tcm-SZ-21体内生物学分布对2只实验兔分别于注射99Tcm-SZ-21后2min～3h不同时间点经对侧耳缘静脉采血,测量放射性计数,观察药物血液廓清情况。3h显像结束后处死动物,分离局部含血栓血管段及对侧同一长度血管进行离体显像,取心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等组织,称重、测定放射性计数,计算%ID/g。结果:(1)经亲和层析及PEG浓缩后的抗体浓度为2mg/mL,SDS-PAGE电泳证实纯化后产物纯度在95%以上。(2)FCM检测结果表明SZ-21与人、兔血小板GPⅢa均有很强的的结合能力,SZ-21与两者结合的阳性细胞百分率分别为为98%,97%。(3)99Tcm标记SZ-21并经纯化后放射化学纯度大于90%,在体外可稳定6小时以上,并保持较高的免疫活性。(4)兔股动脉血栓模型显像结果表明,注射99Tcm-SZ-21后30min,血栓开始显影,至注射后2h时,血栓影像清晰;血栓模型活体显像时T/M和T/B比值分别为2.55±0.72和1.94±0.51,离体显像时T/B比值为4.43±1.5。结论:采用蛋白G对抗体进行分离和纯化具有高效、快速、纯化效果好的优点。99Tcm-SZ-21与新鲜血栓具有较好的结合能力,靶与非靶组织比值高,能够对血栓进行早期、快速地成像,对于早期血栓性疾病的放射免疫显像有一定的可行性。