弓形虫病是一种常见的人兽共患病,感染率高,对人体有很大危害。目前用于该病的临床药物效果不理想、副作用多,因此需要理想的药物治疗该疾病。自噬相关蛋白3、4和8(TgATG3、TgATG4和TgATG8)的缺失使弓形虫生长受到严重影响。因此,自噬相关基因是抗弓形虫极具潜力的药物靶点之一。ATG6是复合物Ⅰ(包括Vps34,Vps15,Vps30/ATG6,ATG38和ATG14)的组成成份。在饥饿或者莫能菌素诱导的弓形虫内,GFP-TgATG8的聚集能被PI3K抑制剂抑制,表明复合物Ⅰ很有可能参与TgATG8的修饰。但目前关于弓形虫自噬相关蛋白(TgATG6)是否能作为药物靶点尚未得到证实。本研究通过序列分析和构建TgATG6-mCherry稳定表达虫株,分析了TgATG6的进化关系和亚细胞定位。使用CRISPR/Cas9方法敲除TgATG6基因,并分析了TgATG6基因缺失对虫体生长复制的影响。实验结果显示,TgATG6基因在进化关系上与植物来源ATG6同源关系较近。TgATG6均匀分布在弓形虫的胞质内,在16 h饥饿诱导后有聚集发生。该基因的缺失对弓形虫的复制没有影响,然而对虫体侵入宿主细胞能力有一定影响。因此,TgATG6可能作为抗弓形虫病的辅助药物靶点。此外,本研究利用大肠杆菌表达的TgATG8重组蛋白,制备了TgATG8的多克隆抗体。利用该抗体成功建立了TgATG8脂化及亚细胞定位的检测方法。综上所述,本研究利用基因敲除等方法探讨了TgATG6在弓形虫生长复制中的作用,评价了TgATG6作为药物靶点的潜力,为弓形虫药物的筛选提供了依据。