抵挡汤早期干预调控NF-κB信号通路对糖尿病大鼠大血管病变的影响

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目的:本课题探讨了NF-κB信号传导通路在2型糖尿病大血管病变形成和发展中的重要作用,旨在揭示可以通过抵挡汤早期干预的方法减少实验大鼠主动脉 NF-κB蛋白因子及其下游相关细胞因子的表达进而延缓糖尿病大血管并发症的发生发展,为临床预防糖尿病并发大血管病变提供理论依据和新思路,并通过中医经典名方抵挡汤早期实验干预疗效观察,明确破血逐瘀法在预防糖尿病大血管病变中的优势。  方法:健康SD大鼠140只,适应性喂养1周后,随机抽取20只(NC)作为正常对照组,给予标准饲料喂养,其余120只为造模组给予高脂饲料喂养8周后,眼眶采血测空腹血糖和胰岛素计算胰岛素敏感指数 ISI=Ln【(FBG)(FINS)】-1,判断动物出现胰岛素抵抗后,随机选取造模组20只大鼠作为抵挡汤早期干预组,按照人鼠等效剂量予抵当汤3.24g/(kg·d)灌胃,灌胃4周后开始造模。成模后改为普通饲料喂养,随机分为中药早期干预组18只(A),中药中期干预组20只(B),中药晚期干预组18只(C),吡格列酮组19只(D),辛伐他汀组20只(E)和糖尿病模型对照组20只。实验结束时,取材,取大鼠血清,采用酶联免疫法检测血清MCP-1与E-selectin表达;取大鼠主动脉组织,采用Western blot检测NF-κB和MMP-9蛋白表达。  结果:(1)成模后的大鼠出现典型的多饮、多食、多尿症状,伴明显的气味臭秽,模型组血糖明显高于正常对照组,差异有显著的统计学意义(P<0.01)。(2) Western Blot法检测基质金属蛋白酶MMP-9的蛋白表达显示:与正常对照组比较,DM组大鼠胸主动脉 MMP-9蛋白表达明显升高(P<0.05);与DM组比较,抵挡汤早期干预组、抵挡汤中期干预组和辛伐他汀组MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05);与抵挡汤晚期干预组比较,抵挡汤早期干预组大鼠胸主动脉MMP-9蛋白表达明显下降(P<0.05);与DM组比较,抵挡汤早期干预组、抵挡汤中期干预组NF-κB表达明显降低(P<0.05),其中以抵挡汤早期干预组效果最明显。(3)胸主动脉 HE染色观察:正常对照组(NC组)大鼠主动脉厚度适中,管壁光滑,内皮完整,内膜及中层细胞排列规则。糖尿病模型组(DM组)大鼠血管有不同程度的内膜增厚病灶,内膜不光滑,内皮下间隙变宽,平滑肌细胞排列紊乱,病灶表面内皮细胞肿胀,局部内弹力板厚薄不均,偶见断裂分离现象,中膜浅层平滑肌细胞增生、排列紊乱。中药早期干预组的内膜表面较光滑,内皮缺损明显减轻,中膜平滑肌较DM组整齐,仅见较少的病灶。  结论:(1)高脂饲料喂养加尾静脉注射链尿佐菌素(STZ)可以成功制备2型糖尿病大鼠模型。(2)予抵挡汤早期干预具有显著降低糖尿病大鼠大血管内皮细胞 NF-κB蛋白的表达,进而抑制其下游的相关细胞因子活化,减轻局部的炎症反应,进而延缓糖尿病大血管病变的发展进程的作用。
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