【摘 要】
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由于大肠杆菌系统能够高水平地表达外源基因,目前在基因工程产品的研究和生产中已得到广泛的应用。但是现有的各种复性技术对包涵体的复性效率并不高,对一些结构较为特殊的重
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由于大肠杆菌系统能够高水平地表达外源基因,目前在基因工程产品的研究和生产中已得到广泛的应用。但是现有的各种复性技术对包涵体的复性效率并不高,对一些结构较为特殊的重组蛋白质很难实现复性。本研究构建表达质粒,并插入外源基因,使其与硫氧还蛋白A(trxA)、日本血吸虫谷胱甘硫基转移酶(GST)构成多顺反子,转录成一条mRNA,翻译后内氧化还原的的微态势,从而促进外源蛋白的二硫键正确形成,并以可溶形式大量表达于胞质中。本研究成功构建了表达载体psYpu-3b,但也验证了原本试验设计的质粒结构没有预期设想的稳定;并构建了表达载体psYpu-3a,进行了重组子的筛选,进行序列测定验证,研究了pGEX-4T-2、psYpu-3a中GST蛋白诱导表达及可溶情况,得到了筛选重组子的过程中不宜采用colony PCR及plasmid PCR,而适宜采用酶切分析及菌体诱导表达后SDS-PAGE电泳挑选阳性克隆的结论;构建了表达质粒pSYPU-3a-AGAP,通过2pSYPU-AGAP可溶性的验证研究,证实试验成功了构建了质粒pSYPU-3a,使TrxA与GST在T7强启动子的控制下共转录并翻译成两条独立的肽链。GST单独表达及与TrxA共表达时可溶性都不佳,而TrxA表达的可溶性很好。证明了质粒pSYPU-3a-AGAP的构建验证了表达载体pSYPU-3a有利于外源基因的可溶性表达
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