【摘 要】
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目的:探索巴西苏木素对IL-1β诱导的大鼠膝关节骨性关节炎细胞模型中的软骨细胞增殖保护作用及内质网应激通路的变化,为Brazilin应用于临床KOA治疗提供理论基础。方法:1、大鼠原代软骨细胞的分离,甲苯胺蓝、番红O、阿尔新蓝染色对软骨细胞进行鉴定,CCK8检测巴西苏木素对正常软骨细胞增殖活力的影响。2、实验分组为正常软骨细胞组（对照组）,其余组均用IL-1β（10ng/ml）处理48h建立体外K
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目的:探索巴西苏木素对IL-1β诱导的大鼠膝关节骨性关节炎细胞模型中的软骨细胞增殖保护作用及内质网应激通路的变化,为Brazilin应用于临床KOA治疗提供理论基础。方法:1、大鼠原代软骨细胞的分离,甲苯胺蓝、番红O、阿尔新蓝染色对软骨细胞进行鉴定,CCK8检测巴西苏木素对正常软骨细胞增殖活力的影响。2、实验分组为正常软骨细胞组（对照组）,其余组均用IL-1β（10ng/ml）处理48h建立体外KOA细胞模型,分为模型组（IL-1β组）、Brazilin低剂量组（2.5μg/ml）、Brazilin中剂量组（5μg/ml）、Brazilin高剂量组（10μg/ml）进行以下实验:显微镜拍照观察各组细胞形态变化,ELISA法检测TNF-α、Collagen Type II、MMP-13的表达,Caspase-3活性试剂盒检测各组酶的活性,QRT-PCR和WB分别检测GRP78、IRE1、XBP1、CHOP、Caspase-3、Collagen Type II、MMP-13的基因和蛋白的表达。结果:1、通过甲苯胺蓝、番红O、阿尔新蓝染色对软骨细胞进行鉴定,本实验分离获得纯度较高的大鼠乳鼠原代软骨细胞。2、CCK8检测巴西苏木素对软骨细胞的增殖和毒性作用,结果证明在10ug/ml的浓度时,开始出现抑制软骨细胞增殖现象,浓度大于14ug/ml后抑制率具有统计学差异（P＜0.05）。3、IL-1β诱导的KOA细胞模型中,相差显微镜观察,IL-1β组较多细胞发生皱缩、染色质固缩、细胞质和细胞核裂解碎片现象,提示细胞凋亡的发生,巴西苏木素可以降低IL-1β诱导的凋亡发生,且成剂量依赖。4、Caspase-3活性试剂盒检测IL-1β组Caspase-3活性升高,ELISA法检测IL-1β组TNF-α、MMP-13的表达增高,Collagen Type II的表达降低,导致了软骨细胞的损伤,巴西苏木素处理后有效地逆转了相关因子的表达和激活。5、IL-1β组ERS通路标志分子GRP78、CHOP表达水平增加,IRE1-XBP1通路激活,提示IL-1β诱导的软骨损伤机制可能与ERS通路有关,而Brazilin处理后抑制了ERS通路下游因子的激活,促进上游分子在软骨细胞修复中发挥作用。结论:Brazilin对IL-1β诱导的KOA细胞模型中软骨具有保护作用,其保护作用可能是通过激活ERS中IRE1-XBP1通路来实现的。
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