媒介昆虫严重危害人类健康,据估计传染病中2/3由媒介昆虫传播。世界史上许多危害严重的虫媒传染病如鼠疫、斑疹伤寒、黄热病、疟疾等都曾造成广泛的流行并夺去成千上万人的生命。当今世界随着人类交往的日益频繁,发现许多新的和重新出现的虫媒传染病。化学防治一直是媒介综合治理的主要方法。杀虫剂的大量、连续使用导致了媒介抗药性的发生和发展。目前,世界范围内至少已有504种昆虫产生了抗药性,包括主要的媒介昆虫,其中109种(亚种)蚊对一种或多种杀虫剂产生了抗性。杀虫剂抗性直接影响着虫媒传染病的流行和重新流行,因此,研究媒介抗药性产生的机制并进行适宜治理实乃当务之急。本研究拟从克隆抗药性相关基因入手,并对其进行功能鉴定,然后运用RNAi技术抑制抗药性基因,为探讨最终治理媒介抗药性奠定基础。为此,本文进行了以下几个方面的研究。 第一部分 淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因的分子克隆与功能研究 研究一 淡色库蚊细胞色素P450 CYP6F1基因的分子克隆、序列分析及表达差异鉴定 为克隆淡色库蚊细胞色素P450(CYP6F1)基因并对其进行表达差异的鉴定,本研究采用RT-PCR技术和RACE策略,从淡色库蚊(Culex pipiens pallens)对溴氰菊酯抗性品系4龄幼虫中克隆细胞色素P450基因(CYP6F1),用相应的软件进行生物信息学分析,并用定量PCR和半定量RT-PCR分析敏感、抗性品系蚊的CYP6F1表达水平及对蚊各期CYP6F1进行表达差异鉴定。结果表明,成功克隆出CYP6F1基因及其等位基因CYP6F1v1。CYP6F1基因全长1639 bp,