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第一部分慢性肉芽肿病患儿临床与分子特征研究目的:探讨26例慢性肉芽肿病（CGD）患儿的临床特征,实验室检查结果及基因突变特征。方法:1.收集2015年6月-2017年2月在重庆医科大学附属儿童医院收治的26例CGD患儿临床资料和实验室检查结果并分析总结。2.流式细胞术分析患儿中性粒细胞呼吸爆发功能,并计算中性粒细胞氧化指数NOI（刺激后平均荧光强度/刺激前平均荧光强度）。3.PCR直接测序法分析患儿CGD相关基因（CYBB、CYBA、NCF1、NCF2）。结果:1.一般情况:26例患儿均为男性,15例（57.7%）来自我国西南地区,平均起病年龄2.3月,平均诊断年龄1.4岁,14例（53.8%）有家族史（男性亲属早年夭折）。2.临床表现:26例患儿均有反复发热,肺炎（24例,92.3%）、腹泻（13例,50%）、皮肤黏膜及皮下组织感染（14例,53.8%）、肝脾肿大、肝功能异常（12例,46.2%）为本组患儿最常见的临床表现。21例接种卡介苗的患儿中14例（66.7%）发生BCG接种异常反应（卡疤化脓、BCG淋巴结炎、肺结核）。此外,3例（11.5%）发生肝脓肿,2例（7.7%）常患尿路感染3.实验室检查:本组患儿多出现外周血白细胞总数增高,以中性粒细胞为主,多有CRP增高。淋巴细胞分类未见明显异常,免疫球蛋白正常或代偿性增高,其中9例（34.6%）出现Ig E明显增高。除2例患儿NBT正常外,其余21例（80.8%）NBT均明显降低,多数PMA刺激后为0。仅50%患儿找到致病病原菌。4.呼吸爆发试验及基因突变分析:患儿NOI多数低于2（1.365±0.1018）,明显低于正常值（正常人>100）,患儿母亲NOI正常或低于正常值;21例（80.8%）患儿发现CYBB基因突变,1例（3.8%）CYBA突变,4例（15.4%）尚未明确致病基因,发现15名XLR-CGD携带者。结论:CGD患儿多于生后即发生严重的细菌及真菌感染,患儿伴有BCG接种异常反应及男性亲属早年夭折家族史,白细胞总数显著增高,以中性粒细胞为主,NBT异常,免疫球蛋白正常或升高,则需警惕CGD。流式细胞术检测中性粒细胞呼吸爆发功能可快速诊断CGD,基因检测可进一步确诊患者、发现携带者,有产前诊断意义。第二部分慢性肉芽肿病患儿记忆B细胞减少的相关因素研究目的:探讨CGD患儿是否存在外周血记忆B细胞（MBC）减少的现象,寻找其减少的原因;并探索IFN-γ治疗CGD患儿,减少反复感染的可能机制,为临床运用IFN-γ治疗和预防反复感染提供理论依据。方法:1.流式细胞术检测CGD患儿MBC百分比、CD4+T细胞表面CD40L表达量、Tfh细胞及其表面PD-1百分比。2.不同浓度s CD40L（1μg/ml、1.5μg/ml、2μg/ml）与正常儿童外周血PBMC共同刺激培养24h、36h、48h,流式细胞术检测MBC数量的变化。3.分别用不同浓度的外源性H2O2（10μmol/L、30μmol/L）、IFN-γ（2000U/ml、3000U/ml）与CGD患儿外周血PBMC共同刺激培养24h,流式细胞术检测MBC数量的变化。结果:1.CGD患儿MBC百分比（1.267%±0.1416%）较健康对照儿童（2.824%±0.27%）明显降低（P<0.0001）。2.CGD患儿CD4+T细胞表面CD40L百分比（8.186%±2.736%）较健康对照儿童（46.43%±4.619%）明显降低（P<0.0001）。3.CGD患儿外周血Tfh细胞（5.625%±0.5005%）与健康儿童（6.269%±1.177%）无显著差异（P=0.5614）。PD-1百分比（9.039%±1.984%）与健康儿童（18.26%±10.11%）无显著差异（P=0.7546）。4.外源性补充s CD40L不能促进健康儿童MBC增高,MBC百分比随培养时间延长逐渐降低（P=0.0028）。5.外源性补充H2O2、IFN-γ对CGD患儿MBC无明显刺激作用,相反,MBC百分比随培养时间延长逐渐降低（P<0.0001）。结论:CGD患儿外周血MBC减少可能是患儿反复感染的原因,MBC减少可能与CD4+T细胞表面CD40L表达减少相关,虽然CGD患儿外周血Tfh细胞数量正常,但仍需进一步分析Tfh细胞表面CD40L表达情况以明确Tfh细胞功能是否正常。IFN-γ并不通过刺激CGD患儿外周血MBC增殖发挥治疗作用。第三部分3例白细胞黏附分子缺陷病Ι型的临床及分子特征分析目的:探讨3例白细胞黏附分子缺陷病Ι型（LAD-1）患儿的临床特征和CD18蛋白表达异常及基因突变特征。方法:1.总结3例患儿临床资料,常规免疫学筛查除外常见原发性免疫缺陷病。2.流式细胞术检测白细胞表面CD18分子。3.PCR测序分析患儿及其父母ITGB2基因。结果:1.临床表现:患儿均自新生儿起以脐炎起病,之后经历反复皮肤黏膜及软组织感染（肺炎、中耳炎、鹅口疮、牙龈炎伴乳牙早脱）,其中2例（例1、例2）有脐带脱落延迟史（>21天）,2例（例1、例3）有慢性皮肤感染及伤口愈合延迟（>1月）,1例（例1）家族中有早年夭折患儿。2.实验室检查:患儿均有外周血白细胞总数显著增高,以中性粒细胞为主,因反复感染,常伴有贫血,免疫球蛋白Ig G、Ig A、Ig M增高,淋巴细胞分类、NBT无明显异常。3.CD18流式分析:患儿白细胞表面CD18分子表达明显降低,例2为重度缺陷（CD18在淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞上分别为0、0.23%、0）,例1、例3为中度缺陷（例1:9.49%、0.04%、0.45%;例3:10.14%、0.67%、2.54%）,但所有父母CD18表达均>90%。4.ITGB2基因分析:发现5种突变位点（c.167168ins GG、c.1884C>A、c.533C>T、c.817G>C、c.1768T>C）,其中2种为新型突变（例1 c.167-168ins GG、c.1884C>A）,并发现5名携带者。结论:自幼反复严重皮肤黏膜及软组织感染,尤其伴有脐炎、脐带脱落延迟,伤口愈合延迟,反复牙龈炎伴乳牙早脱,白细胞总数显著增高,以中性粒细胞为主,伴免疫球蛋白正常或升高的患儿需警惕LAD-1。流式细胞术检测白细胞表面CD18分子可快速诊断LAD-1,ITGB2基因分析是诊断的金标准。