【摘 要】
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存在于两栖动物皮肤及其分泌物中的功能性多肽不但结构多样,而且功能各有千秋,发挥着抗菌、抗氧化、抗过敏或促进组织愈合等多种作用。近年来,这些多肽因具有活性强、免疫原
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存在于两栖动物皮肤及其分泌物中的功能性多肽不但结构多样,而且功能各有千秋,发挥着抗菌、抗氧化、抗过敏或促进组织愈合等多种作用。近年来,这些多肽因具有活性强、免疫原性低、细胞毒性低等优点而备受瞩目,成为新型药物开发和新型疗法等领域的研究热点。本研究以台北纤蛙(Hylarana taipehensis)、理县湍蛙(Amolops lifanensis)和棘皮湍蛙(Amolops granulosus)的皮肤组织及其分泌物为实验材料,通过RP-HPLC的方法纯化并鉴定了14种抗菌肽和抗氧化肽。通过建立上述三种蛙皮肤组织全长的c DNA文库和筛选阳性克隆,共获得46条编码不同多肽前体的c DNA序列,共编码37种不同的成熟肽。通过对这些多肽结构和功能的分析,最终确定它们主要为抗菌肽和抗氧化肽,这些多肽隶属于12个多肽家族,通过Blast比对发现,其中taipehensis-1TP1(TLIWEFYHQILDEYNKENKG)和taipehensis-2TP1(CLMARPNYRCKIFKQC)两条多肽的序列结构和功能从未报道,应为两个新多肽家族的成员。同时本研究利用LC-MS/MS的多肽组学方法对克隆到的多肽在皮肤中的表达情况进行了全面分析和鉴定。本研究中8条多肽具有抗氧化活性,其中6条兼具抗菌活性,其余多肽大多为抗菌肽。从台北纤蛙体内获得的taipehensin-1TP1和taipehensin-2TP1在表现出较强的清除ABTS·+和/或DPPH·自由基能力的同时,不会导致人血红细胞溶血,因而在医疗和食品加工等领域具有较好的开发潜力。本研究发现了多条抗菌肽和抗氧化肽,为抗菌肽和抗氧化肽的结构、功能和作用机制等理论研究打下基础,也为新型抗菌和抗氧化药剂的研发提供了参考。
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