抗人CD33单克隆抗体(HIM3-4、WM53、M195)抗原识别表位的初步研究

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:smaboat
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目的:确定抗人CD33单克隆抗体(HIM3-4、WM53、M195)抗原识别表位所在区域.方法:RT-PCR的方法克隆四个CD33胞外区不同长度的基因片段EP1(全长胞外区17-262氨基酸)、EP2(60-262氨基酸)、EP3(115-262氨基酸)、EP4(170-262氨基酸),将四个基因片段定向克隆入真核表达载体pDisplay,分别将空载体和构建的质粒通过磷酸钙沉淀法转染入293T细胞,瞬时转染48h后利用流式细胞仪通过抗HA(Hemagglutinin A)抗体标记以检测各质粒在细胞表面的蛋白表达,分别用三种抗人CD33单克隆抗体(HIM3-4、WM53、M195)标记转染后的细胞,检测三种抗体和不同区段的结合活性.结果:1克隆CD33胞外区不同长度的基因片段.2构建四种CD33胞外区不同长度的基因片段表达质粒pDisplay/EP1、pDisplay/EP2、pDisplay/EP3、pDisplay/EP4.3 CD33胞外区不同长度片段蛋白成功表达在293T细胞膜表面.4抗人CD33单克隆抗体HIM3-4能识别pDisplay/EP1、2、3表达的蛋白,单克隆抗体WM53能识别pDisplay/EP1表达的蛋白,单克隆抗体M195则均能识别四个片段所表达的蛋白.结论:1单克隆抗体HIM3-4识别的CD33抗原表位位于115-170氨基酸.2单克隆抗体WM53识别的CD33抗原表位位于17-60氨基酸.3单克隆抗体M195识别的CD33抗原表位位于170-262氨基酸.
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