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核酸和蛋白质等生物大分子是生命现象的物质基础,他们对生物的生长、遗传、变异等现象都起着重要的决定作用,也与肿瘤的发生、病毒的感染、射线对机体的作用都有重要关系。
探针技术是研究核酸和蛋白质结构、功能、定性、定拿的重要手段,目前已成为生命科学领域的前沿课题。本论文主要研究了新的核酸荧光探针,建立了核酸的灵敏分析方法,并探讨了荧光探针与核酸间的相互作用机理和发光机理。
论文的第一部分综述了核酸探针的研究进展及维生素分析方法的研究现状。
论文的第二部分,研究了桑色素-Y<3+>-CTAB-核酸体系的相互作用及其分析应用。研究发现,在Tris-HCl缓冲溶液(pH=7.0)中,核酸能使桑色素-Y<3+>-CTAB体系的荧光有明显增强,其增强程度与核酸的浓度在一定范围内呈良好的线性关系。在最佳实验条件下,fsDNA和yRNA的线性范围分别为5×10<-3>-4μg/ml和5×10<-3>-μg/ml,它们的检出限分别为:1.7和1.5ng/ml。该方法已用于合成样品的测定,其结果令人满意。机理研究表明,桑色素-Y<3+>以静电引力和CTAB及核酸发生反应,从而在体系中形成一个大的桑色素-Y<3+>-CTAB-核酸络合物;而同时CTAB-核酸可以为桑色素-Y<3+>络合物提供良好的疏水环境,这一环境具有较低的极性和较大的微粘度,因此降低了桑色素-Y<3+>和水分子之间的碰撞,减少了因碰撞而导致的体系能量损失,提高了体系的荧光量子产率,使体系的荧光强度大大增强。
论文的第三部分,研究了槲皮素-核酸体系的荧光增强效应及核酸的测定。研究发现,槲皮素本身荧光很弱,核酸能增强槲皮素的荧光强度。在HMTA-HCl缓冲溶液中(pH=5.5),核酸能明显地增强槲皮素的荧光强度。在最佳实验条件下,增强的荧光强度与核酸的浓度在一定范围内成线性关系,fsDNA,yRNA和ctDNA的检出限分别达到3.5ng/mL,2.6ng/mL和0.78ng/mL。研究指出,该方法的稳定性好,操作简便和灵敏度高等特点。该法已用于实际样品的测定,结果令人满意。同时还探讨了核酸与槲皮素之间的相互作用及荧光增强的机理。
论文的第四部分主要研究了在阳离子表面活性剂存在下,核酸对姜黄素荧光增强作用及其分析应用。结果表明,核酸和CTAB对姜黄素的荧光具有明显的增强作用,且该体系的荧光强度与核酸的浓度在一定范围内呈线性关系。fsDNA、yRNA和ctDNA的线性范围分别为5.0x10<-9>9-1.0x10<-6>g/mL、5.0x10<-9>-10.x10<-6>g/mL和
5.0x10<-9>-1.0×10<-6>g/mL。它们的检出限(S/N=3)分别为0.32,1.4和O.76ng/mL。该法己用于实际样品的测定,结果令人满意。我们对该体系的作用机理进行了研究,研究认为体系中荧光增强的原因有两点,其一是CTAB-核酸为姜黄素提供了弱极性的疏水微环境,减少了能量损失而增强了姜黄素的荧光量子产率;其二是体系中形成了三元络合物,拉近了分子之间的距离,使姜黄素的特征荧光明显增强。 论文的第五部分研究了钇-芦丁-SDBS体系的荧光特性及芦丁的测定。研究表明,在碱性的条件下,钇(Ⅲ)能与芦丁和表面活性剂十二烷基苯磺酸钠(SDBS)形成三元络合物,该络合物有很强的荧光。由此建立了简单、快速、灵敏的测定芦丁的荧光方法。实验表明,测定的最佳条件为:λ<,ex>/λ<,em>=380.0/540.0nm,Y<3+>(1.5×10<-4>mol/1),SDBS(5×10<-4>mol/1),pH=9.5的Tris-HCl缓冲溶液1.0ml。线性范围2×10<-8>mol/l-2×10<-6>mol/1;回归方程为:F=0.7008+2.1632C C(mol/1)(r=0.99809);检出限:2.2×10<-9> mol/l。该测定方法回收率为96.6-100.7%,结果令人满意。该法已用于实际样品的测定,取得了满意的结果。
本论文的主要特点:
1.探讨了核酸与Y<3+>-桑色素体系相互作用的机理,认为CTAB和核酸可形成络合物,该络合物可通过静电引力和疏水作用力与稀土配合物形成大的络合物,CTAB和核酸为配合物提供了较好的疏水环境,并减少了与水分子碰撞而生成的能量损失,从而使体系的荧光大大增强。
2.研究指出,在一定条件下,核酸能分别增强槲皮素和姜黄素-CTAB体系的荧光强度,因而提出了两种测定核酸的新的荧光技术,并用于实际样品的测定。该方法具有简便快速、灵敏度高等特点
3、研究了钇.芦丁.SDBS体系的荧光特性,建立了测定芦丁的新方法。在碱性条件下钇(Ⅲ)能与芦丁和表面活性剂十二烷基苯磺酸钠(SDBS)形成三元络合物,该络合物有很强的荧光。由此建立了简单、快速、灵敏的测定芦丁的荧光方法。