胸腺肽α1(Tal)是从小牛胸腺组织TF5中分离出来的含有28个氨基酸的小分子多肽,其等电点为4.2,是一种酸性多肽,天然胸腺肽α1的N端是乙酰化的,分子量为3.108KD,结构比较简单,没有糖基化和二硫键。Tα1是一种生物反应调节因子,它是T细胞表面的一种特异性标志,能够促使T细胞的成熟和分化,还可以刺激T细胞、NK细胞分泌IL-2、α-干扰素以及促进IL-2受体的生成。Tα1在免疫受抑制及免疫调节失调的疾病中应用较为广泛,在临床上已经得到了广泛的应用,Tα1作为免疫增强剂也具有显著的疗效。目前,临床应用的Tα1原料药多以化学合成为主,而化学合成的Tα1由于其价格高,合成过程中形成的杂质难以去除,污染大,有一定的毒副作用等原因使得Tα1的临床应用难以普及。从动物胸腺组织中直接提取胸腺肽组分也由于原材料来源的有限,使得此法的应用受到限制。鉴于Tα1的临床应用价值的重要性,及其生物安全性和药物有效性,通过合适的基因工程方法表达来获得大量的Tα1蛋白,引起了越来越广泛的关注。因而如何将Tα1的新工艺从基因工程水平扩大到工业化生产水平,提高产量,就成较为热门的研究之一。据文献报道,Tα1已经在原核、真核以及植物等系统中实现了表达。本研究采用适合于表达真核蛋白质的毕赤酵母表达系统,通过基因工程菌发酵制备Tα1。将人工合成的Tα1单体基因,通过所设计的引物X1和X2扩增后,以EcoRI和EcoRV为酶切位点,通过一端粘末端一端平末端的方式连接到pPIC9K质粒上,构建表达载体pPIC9K-Tα1并转化毕赤酵母GS115,成功构建了基因工程菌GS115-pPIC9K-Tα1;重组菌经甲醇诱导表达,并对诱导表达的条件做了初步的探索；取发酵液上清,过DEAE52、SephadexG-25柱纯化后获得目的蛋白。确定该重组菌的最佳诱导条件为：温度为28℃、时间为72h、诱导剂甲醇的终浓度为1%、pH为6.0、最佳诱导时机为种子液培养至18h。Tricine-SDS-PAGE和HPLC结果表明Tα1基因在毕赤酵母中得以表达,Bradford法测得其表达量约为4.8mg/L。目的蛋白经质谱检测其分子量为3.066KD,与理论值相符。