糙皮侧耳是一种常见的食用菌,也是典型的白腐真菌,能有效地降解农作物秸秆中的木质素。据研究,漆酶（Laccase,Lac）等木质素降解酶系在其降解木质素的过程中起重要作用。但目前有关真菌降解木质素过程中特定漆酶基因功能的研究报道很少。本研究通过对糙皮侧耳漆酶基因家族生物信息学和基因表达模式的分析,确定可能与糙皮侧耳降解木质素相关的候选基因PoLac2。用Posdi和Pogpd启动子分别置换p Cambia 1304双元表达载体中的Ca MV35S启动子。构建PoLac2真核过表达载体,并通过农杆菌介导法转化野生型糙皮侧耳菌丝,以期明确PoLac2在降解秸秆木质素过程中的作用。主要研究结论如下:1.糙皮侧耳对木质素的降解主要在菌丝体时期,培养第30 d的木质素含量相比第5 d下降了约10.01%,而子实体时期木质素含量变化不明显。且糙皮侧耳子实体时期胞外漆酶的活性显著低于菌丝体时期。2.12个糙皮侧耳漆酶的基因结构、保守序列和Loop序列的一致性存在一定差异,但都具有信号肽序列,编码的蛋白质属于分泌性的胞外蛋白酶。12个糙皮侧耳漆酶基因不均匀地分布在5个scaffold中,且在scaffold 6和scaffold 11上成簇排列。在棉秸秆培养的第10 d,PoLac2相对表达量最高,且与PDA培养条件下相比,表达量显著上调,表明PoLac2可能与糙皮侧耳降解木质素关系密切。3.过表达PoLac2转化子的胞外漆酶活力和PoLac2表达量相比野生型都有不同程度的提高。转化子OE L2-2和OE L2-3的木质素降解率与野生型相比分别提高了6.36%和2.36%。过表达PoLac2能提高糙皮侧耳对秸秆木质素的降解能力。4.~1H-NMR谱图结果显示,转化子OE L2-2处理的木质素G/S比（1.42）明显低于野生型（1.96）,但其紫丁香基芳香环上质子比例（0.36）与野生型相比几乎没变化。转化子OE L2-2处理加速了棉秸秆木质素中G单元的降解。此外,与野生型相比,实验组木质素中β-O-4、β-1和β-β结构的质子比例减小,过表达PoLac2促进了棉秸秆木质素单元间主要连接键结构的断裂。5.与野生型相比,OE L2-2的产量和生物转化率较低,菇蕾形成时间延长,但其子实体中的营养成分、活性成分含量大都显著高于野生型。