论文部分内容阅读
目的：检测取自人体不同部位、不同Dukes分期的人结肠癌细胞株SW480(取自结肠癌组织,Dukes B期)、SW620(取自结肠癌淋巴转移组织,Dukes C期)及COLO205(取自结肠癌腹腔转移腹水组织,Dukes D期)中PIAS3的表达水平,筛选PIAS3相对高表达细胞株进行shRNA质粒转染干预实验；通过转染PIAS3shRNA质粒,下调结肠癌细胞株中PIAS3基因的表达水平,研究该基因的差异性表达对结肠癌细胞增殖活性、凋亡和细胞周期的影响。方法：运用实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)检测SW480、SW620及COLO205三种入结肠癌细胞株中PIAS3基因的表达水平；运用脂质体介导将PIAS3shRNA质粒及无关序列shRNA对照质粒转染入人结肠癌细胞株,干预后区分为：PIAS3shRNA转染组(转染PIAS3shRNA质粒)、无关序列shRNA转染组(转染无关序列对照质粒)及空白对照组(不进行转染干预)；采用Real-Time PCR. Western blot检测质粒转染干预对PIAS3基因的抑制效果；MTT(噻唑蓝)法检测PIAS3表达下调对结肠癌细胞增殖活性的影响；流式细胞仪检测PIAS3表达下调对人结肠癌细胞周期和凋亡的影响。结果：Real-Time PCR和、Vestern blot检测显示,PIAS3在三种结肠癌细胞株中均呈阳性表达,而在COL0205细胞株中的表达水平显著高于其它两种细胞株,因此选择COL0205细胞进行shRNA质粒转染干预实验。与空白对照组及无关序列shRNA转染组相比,PIAS3shRNA质粒转染组COLO205细胞PIAS3基因在mRNA和蛋白水平的表达明显降低。MTT分析显示,与无关序列shRNA转染组及空白对照组比较,PIAS3shRNA质粒转染组COL0205细胞增殖活性明显增强。流式细胞仪分析显示,PIAS3shRNA转染组与无关序列shRNA转染组及空白对照组相比,细胞增殖明显增快,G1、G2期细胞所占比例均减少,S期细胞所占比例显著增多,细胞总凋亡率明显减少。结论：PIAS3在SW480、SW620及COL0205三种结肠癌细胞株中均有表达。PIAS3shRNA质粒转染能有效下调PIAS3基因在结肠癌细胞株中的表达水平。PIAS3表达水平下调后,人结肠癌细胞的增殖活性增强,促进细胞的增殖和分裂,抑制其凋亡。PIAS3是抑癌基因的论述,在人结肠癌中通过本实验得到进一步的论证,为深入研究PIAS3作为生物分子标记物应用于恶性肿瘤的靶向治疗提供了理论依据。