钙离子通道在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用

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背景钙库调控钙内流(Store-operated Ca2+entry, SOCE)是一个普遍存在的调节钙离子进入到细胞内的机制,参与包括细胞增殖在内的众多生物学过程。基质相互作用分子1(Stromal interaction molecule1, STIM1)蛋白和Orai1蛋白是SOCE的主要组成部分。肾小球系膜细胞(Glomerular mesangial cells, GMCs)参与肾小球滤过率的调节。从临床角度来看,许多生理学功能随着老龄化都会发生改变。目的探讨SOCE在老年大鼠肾小球系膜细胞中的变化和对增殖的作用。方法1年轻和老年大鼠GMCs中的SOCE原代培养年轻(3月龄)和老年(22月龄)大鼠GMCs,通过激动剂引起内钙释放、激活SOCE,利用Leica TCS SP5激光共聚焦系统检测细胞内钙离子浓度的变化。2STIM1和Orai1在年轻和老年大鼠肾小球中的表达使用Western Blot及免疫荧光方法分别检测STIM1和Orai1在年轻和老年大鼠肾小球中的表达水平。3STIM1和Orai1在大鼠GMCs的SOCE中的作用将STIM1siRNA、Orai1siRNA分别转染到原代培养的年轻大鼠GMCs中,利用Leica TCS SP5激光共聚焦系统检测细胞内钙离子浓度的变化。原代培养年轻和老年大鼠GMCs,采用免疫荧光方法检测钙库耗竭介导的STIM1和Orai1聚集斑点形成。4老年大鼠GMCs的增殖能力及其机制使用MTT及BrdU分析方法分别检测年轻和老年大鼠GMCs的增殖能力,转染STIM1siRNA、Orai1siRNA原代培养的年轻大鼠GMCs的增殖能力。结果1.与年轻大鼠相比,在老年大鼠GMCs中,激动剂引起的SOCE明显减弱。2.与年轻大鼠相比,STIM1和Orai1在老年大鼠肾小球中的表达明显减少。3.转染STIM1siRNA、Orai1siRNA原代培养年轻大鼠GMCs的SOCE明显减弱。4.在年轻大鼠GMCs中,钙库耗竭明显诱导了STIM1和Orai1聚集斑点的形成。5.与年轻大鼠相比,老年大鼠GMCs中STIM1和Orai1聚集斑点的形成明显减弱。6.与年轻大鼠相比,老年大鼠GMCs的增殖能力明显减弱。7.转染STIM1siRNA、Orai1siRNA原代培养年轻大鼠GMCs的增殖能力明显减弱。结论STIM1和Orai1表达减少导致的SOCE降低是老年大鼠GMCs增殖减弱的原因之一。
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