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气肿疽由气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)引起，是芽孢革兰氏阳性细菌，对牛、羊造成破坏的一种致命性疾病，有孢子污染的草场放牧的反刍动物皆易感染。常见的临床患病部位多见肌肉丰满处，引起炎性、气性坏疽，触压有捻发音等临床症状，能够引起组织毒性缺氧，是牛羊的一种高死亡率疾病。除了反刍动物，其他动物很少感染。放牧的新生反刍动物对气肿疽最敏感。气肿疽可存在于流行地区的土壤和粪便中。一旦牧场受到严重污染，易感动物感染病例一般每年都发生。目前延边州地区发生多起病例，形势严峻，使黄牛养殖户及人民财产受到不小的损失，潜在的危害到人的安全生产，急需对该病采取有效的防控措施。 本研究根据GenBank气肿疽鞭毛基因（登录号: AB058932）的参考序列，设计一对可扩增完整开放阅读框的特异性引物扩增出延边株气肿疽FliA基因，将PCR扩增的长度为1267bp的FliA连接至克隆载体，对克隆的pMD-19t-FliA质粒进行测序分析，将测序分析正确的质粒上的目的基因，连接至真核表达载体，把鉴定正确的pVAX1-FliA表达质粒转染至Vero细胞中，运用FITC检测技术检测FliA基因在Vero细胞中的表达产物。之后通过质粒大提试剂盒对pVAX1-FliA重组质粒进行质粒大提，制备出延边株气肿疽鞭毛基因核酸疫苗。应用制备的核酸疫苗，按照pVAX1-FliA真核表达质粒实验组及pVAX-1空载体对照组、PBS对照组对BALB/c小鼠进行免疫接种。通过间接ELISA检测IgG、IgG1及IgG2a抗体水平;通过间接ELISA试剂盒检测IL-4和IFN-γ细胞因子水平。 结果显示，扩增的气肿疽FliA基因片段为1267 bp，测序结果与NCBI上的6个基因型比对，核苷酸序列同源性为93％～100％，与德国株12S0467核苷酸序列同源性达到100％。构建的pVAX1-FliA真核表达质粒可在哺乳动物真核细胞内稳定表达。pVAX1-FliA肌肉注射，免疫过的小鼠可以产生体液免疫应答和细胞免疫应答。 该研究对延边地区本地分离株的鞭毛抗原基因进行测序和分析，对本地区黑腿病的防控工作提供参考，为本地株以鞭毛蛋白基因为抗原的DNA疫苗奠基了扎实的基础。为了对延边地区黑腿病的有效控制，制备低毒安全的pVAX1-FliA核酸疫苗，通过免疫小鼠，对该疫苗的免疫效果进行了评估。