人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)是胎盘合体滋养层所分泌的一种糖蛋白激素。hCG及相关分子的含量测定可用于诊断妊娠、异位妊娠、唐氏综合征、滋养层肿瘤、非妊娠性恶性瘤等。目前在临床诊断中,国外全自动分析系统为hCG的临床检测提供可靠的依据,但是这些系统非常昂贵,难以推广普及。国内hCG检测方法主要有胶体金试纸法、放射免疫分析法及酶联免疫分析等。胶体金试纸检测法快速、简单,但灵敏度较低,一般只能用于定性及半定量检测;放射免疫分析具有放射污染不利于推广;酶联免疫分析依靠比色法或偏振光法进行检测,所受的干扰因素太多,这些都影响到检测的灵敏度和稳定性。因此,目前需要建立一种快速灵敏及适合我国医疗现状的hCG分析方法。本研究利用双抗体夹心法的原理建立起一种检测血清中hCG的微孔板式β-hCG化学发光酶免疫分析(CLEIA)检测方法。主要的研究结果:(1)制备了抗β-hCG单克隆抗体的碱性磷酸酶标记物;(2)比较不同的碱性磷酸酶化学发光底物的反应特性,建立了本研究的ALP-AMPPD的化学发光体系;(3)考察各种反应因素对检测体系的影响,优化并找出最佳反应模式,建立了β-hCG微孔板式CLEIA;(4)对建立的β-hCG的CLEIA的技术性能进行了评价和鉴定。本方法具有宽的检测线性范围(5-500 mIU/ml);分析灵敏度为0.06mIU/ml;分析内变异系数小于7%,分析间变异系数也小于10%;与TSH、FSH、LH和PRL无交叉反应,血红蛋白、胆红素等干扰物的干扰非常低;用校准品基质倍比稀释临床定值血清,稀释度与浓度值的相关系数r>0.99,具有好的健全性;用正常人血清稀释β-hCG阳性血清,作1/2、1/4、1/8和1/16稀释,检测稀释回收率,平均回收率为98.5%,另外,向16.37mIU/mlβ-hCG阳性血清中投入浓度为60、100、140和180mIU/ml的标准品,检测加入回收率,平均回收率为98.20%;将酶标记物和整个分析系统置于37℃下10天,然后,考察方法的分析灵敏度、高低质控血清检测值以及精密度,灵敏度检测值属于正常范围,质控品检测值仍处于245.24±24.53 mIU/ml和8.11±0.81 mIU/ml的质控品范围内,其高低值检测变异系数(精密度)都小于10%,本法具有好的稳定性;本检测系统与拜尔公司的ACS:180全自动β-hCG免疫分析系统检测相关系数r=0.9881(y=0.9884x-1.1113)。本研究建立的β-hCG CLEIA有以下特点:(1)灵敏度高、线性范围宽、特异性高;(2)操作简单,检测快速,可进行大规模样品的检测;(3)技术性能明显好于现有的国内产品,并且超过国家规定的检测标准,与进口产品相当(4)能够满足临床检测要求,同时降低检测成本,满足我国基层单位检测需求。