【摘 要】
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本研究的目的是: 1.克隆大鼠视锥细胞．视杆细胞同源结构域(cone-rod homeoboxgene，CRX)基因。 2.构建pEGFP-C3/CRX真核表达载体。 方法： 1.以SD大鼠的眼的总RNA为
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本研究的目的是:
1.克隆大鼠视锥细胞．视杆细胞同源结构域(cone-rod homeoboxgene，CRX)基因。
2.构建pEGFP-C3/CRX真核表达载体。
方法：
1.以SD大鼠的眼的总RNA为模板，采用RT-PCR的方法扩增一段约1000bp的eDNA片段，亚克隆至PMDl8-T载体中，并进行序列分析，对测序结果进行生物信息学分析。
2.抽提pEGFP-C3质粒，对PMDl8-T/CRX重组质粒和pEGFP-C3质粒同时进行限制性内切酶SalI、sacI酶切，构建pEGFP-C3/CRX真核载体，并进行序列分析．
结果：
1.与Sakamoto报道的序列相比较，本实验扩增的序列包含了大鼠CRX基因5端非翻译区部分序列、编码区的全部序列和3端非翻译区部分序列，除位于编码区的第450位碱基A→T外，其他序列与报道完全一致。经软件分析，碱基序列“CTG”或“CAG”均编码同一氨基酸-甘氨酸(Gly，G)，存在编码区单核苷酸多态性(coding-regions single nucleotide polymorphism，英文全称cSNPs)<[1]>。
2.构建TpEGFP-C3/CRX真核载体。
结论：
已成功克隆了大鼠CRX基因的编码序列，构建pEGFP-C3/CRX真核载体，为研究CRX基因的功能及光感受器细胞的定向诱导分化等后续实验奠定了物质基础。
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