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冠状病毒(CoVs)属于冠状病毒科,是自然界广泛存在能够感染人和动物的一大类病毒家族。基于系统发育树分析,国际病毒分类学会(International committee on taxonomy of viruses,ICTV)将 CoVs 分为 alpha-CoV(α 属),beta-CoV(β 属),gamma-CoV(γ属)和delta-CoV(δ属)。目前已知的六种人冠状病毒(HCoV):HCoV-229E、HCoV-OC43、SARS-CoV、HCoV-NL63、HCoV-HKUl 和 MERS-CoV 均属于α属和β属。人冠状病毒通常引起轻微的上呼吸道感染症状,而2003中国暴发的SARS-CoV引起的严重急性呼吸综合征(SARS)和2012年中东地区流行的MERS-CoV引起中东呼吸综合征(MERS),分别造成高达10%和40%的死亡率。SARS和MERS的暴发,表明高致病性的人冠状病毒严重地威胁着人类的生命健康,因此建立快速、灵敏的检测方法对于及时实施有效的预防控制措施、阻止疾病的进一步传.播至关重要。一方面,大量来自全球各地的朝圣者和游客前往中东地区,增加了 MERS-CoV传播的风险,急需建立一种高通量的冠状病毒检测手段,实时监测冠状病毒在人群中的分布,尤其是MERS-CoV;另一方面,一系列研究表明冠状病毒能通过重组变异产生新的病毒,通过跨物种传播给人类。因此,理想的检测方法不仅能够准确鉴定已知的人冠状病毒,同样也能够为发现新型人冠状病毒提供线索。本课题的研究旨在建立一种基于多重PCR与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联用的冠状病毒高通量检测方法(mCoV-MS),不仅能准确监测已知的6种人冠状病毒,还能为发现新型人冠状病毒提供线索。该检测方法包两个部分:Panel A和Panel B。Panel A对已知的6种人冠状病毒进行多靶向的17重检测,PanelB完成几乎覆盖自然界已知α属和β属冠状病毒的17重筛查。结果表明,所有检测用引物和探针特异性良好,与其他常见呼吸道病毒无交叉反应。为了验证该方法的检测能力,实验中筛查了包含384份啮齿类动物或蝙蝠的咽拭子和肛拭子样本,以及131份呼吸道感染患者的鼻腔拭子和咽喉拭子样本。结果显示本方法与宏基因组学分析及PCR-测序的结果有很好的一致性。该方法操作简便易行,灵敏度高,可以检测α属和β属的冠状病毒,为动态监测冠状病毒的感染和流行情况提供强有力的手段。因此,该方法能够与下一代测序技术结合用于大规模样本的筛查研究,为预警新型冠状病毒引发的新发传染病做好应对准备,同时也为新发传染病监测提供新模式。