基于新孢子虫rSRS2-SAG1-GRA7融合蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用

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新孢子虫是一种顶复亚门寄生虫,终末宿主为犬科动物,多种动物均可作为其中间宿主。新孢子虫能够引起犬和多种动物的神经和繁殖系统障碍,对牛的危害最为严重,由新孢子虫病引起的母牛流产给世界范围内的养牛业造成巨大的经济损失。因此建立针对牛新孢子虫病的间接ELISA检测方法,对新孢子虫病的诊断和防控具有重要意义。本研究根据同源重组的原理,将新孢子虫Nc SRS2、Nc SAG1、Nc GRA7基因与p ET-28a载体骨架进行连接,构建了28a-S2-G1-A7表达质粒,并诱导表达出r SRS2-SAG1-GRA7融合蛋白,纯化的融合蛋白经反应性和特异性鉴定合格后,作为包被蛋白,建立一种检测牛新孢子虫病的间接ELISA方法。对该方法的条件进行了优化,并确定了其临界值。该方法敏感性高、特异性强、重复性好,且与权威IFA方法进行比较,具有良好的敏感性和极高的特异性。使用以上建立的检测方法对宁夏地区多家牛场流产奶牛的新孢子虫病流行情况进行了调查。结果显示,该地区各牛场流产奶牛中新孢子虫病阳性率在16.67%-100%之间,总的流行率高达41.64%。本研究具有较好的应用价值,研究结果为牛新孢子虫病的血清学诊断及流行病学监测提供了新的有效手段。
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