目的：　　 1.观察成纤维细胞生长因子-21(rhFGF-21)对H9c2心肌细胞I/RI的保护作用。　　 2.验证rhFGF-21通过抗细胞凋亡发挥保护H9c2细胞作用。　　 3.验证rhFGF-21通过抗氧化应激、抗炎发挥保护H9c2细胞作用。　　 4.验证rhFGF-21通过Akt/GSK-3β发挥保护H9c2细胞作用。　　 5.运用蛋白质组学探索rhFGF-21保护I/RI更多可能的药理作用机制。　　 6.验证rhFGF-21通过改善细胞能量代谢发挥H9c2细胞保护作用。　　 方法：　　 1.在模型Ⅰ、Ⅱ的基础上给予梯度浓度的rhFGF-21处理，之后CCK-8法测定各组相对存活率。　　 2.在模型Ⅱ的基础上给予梯度浓度的rhFGF-21处理，之后用Hoechst33258荧光染料对细胞核染色，观察细胞核改变;用Stains-All染料对细胞进行着色，观察细胞形态变化;用Western-Blot方法检测各组中Caspase-3蛋白表达量的改变。　　 3.在模型Ⅱ的基础上给予梯度浓度的rhFGF-21处理，之后采用DHE荧光探针检测细胞内超氧阴离子，Western Blot检测炎症因子TNF-α、PAI-1表达量。用qPCR检测模型Ⅰ组、Ⅱ组中H9c2细胞内rhFGF-21表达情况。CCK-8法检测rhFGF-21对H2O2处理H9c2细胞的保护情况。　　 4.在模型Ⅱ的基础上给予梯度浓度的rhFGF-21处理，之后收取细胞裂解液，用Western Blot检测pAkt、pGSK-3β的表达情况;用选择性Akt抑制剂API-2干扰Akt磷酸化，观察其对rhFGF-21保护作用的影响。　　 5.在模型Ⅱ的基础上给予梯度浓度的rhFGF-21处理，之后收取细胞裂解液，经前处理后使用2D-GE技术分离蛋白质，应用2D-Master软件分析差异斑点，对差异显著的蛋白斑点进行质谱鉴定，归类分析。　　 6.对于蛋白质组学分析出ATP合酶在rhFGF-21作用下发生了改变，考虑到rhFGF-21可能是对于细胞能量代谢进行了干预，因此我们进一步对各组能荷变化行实验论证。　　 结果：　　 1.在细胞活性检测实验中，CCK-8检测显示，在模型Ⅰ组与模型Ⅱ组中，rhFGF-21处理组对比模型组细胞存活率均有显著增加(P＜0.05)，且呈现量效关系。小剂量多次给药实验发现，量效关系的表象是由于rhFGF-21半衰期短（降解）造成的，而rhFGF-21保护作用实质上是时间依赖性效应，即一段时间内保持rhFGF-21低浓度稳定即可发挥保护作用。同时rhFGF-21各种剂量均不具有促H9c2细胞增殖作用(P＞0.05)，极高剂量(＞4μg/ml)可诱发细胞凋亡。　　 2.抗凋亡相关实验中，rhFGF-21可明显抑制IR诱导的细胞形态变化;亦可减少凋亡引发的细胞核碎裂(P＜0.05);凋亡信号特异性蛋白Caspase-3在模型组中断裂激活的量显著升高，而给予rhFGF-21处理后激活减少(P＜0.05)。　　 3.抗氧化应激相关实验中，rhFGF-21处理组中的超氧阴离子含量明显少于模型组。在H2O2模拟氧化应激损伤实验中，rhFGF-21也表现出显著保护作用。此外，模型组中内源性的rhFGF-21表达随损伤的加剧而减少。　　 4.pAkt以及下游GSK-3β的磷酸化水平在I/RI时显著下降，rhFGF-21处理后其磷酸化水平得以恢复，而运用Akt抑制剂则可拮抗rhFGF-21的保护作用。　　 5.在蛋白质组学研究中，通过2D-Master软件对比分析找出了64个差异斑点，并对其中26个蛋白斑点进行了质谱鉴定。之后依据蛋白质在各组中的表达情况进行分类，重点讨论了I/RI和rhFGF-21相关性的蛋白质。　　 6.蛋白质组学研究发现，与模型组相比，rhFGF-21处理后ATP合酶活力明显恢复，因此对各组细胞能荷进行检测，发现rhFGF-21可显著恢复I/RI细胞的供能。　　 结论：　　 1.rhFGF-21可以显著提高IR处理的H9c2心肌细胞的存活率，且为时间依赖性作用。治疗剂量的rhFGF-21无促细胞增殖作用，极大剂量的rhFGF-21则抑制细胞存活。　　 2.rhFGF-21具有抗IR诱导的H9c2细胞凋亡作用，同时也抗氧化应激、抗炎作用，这些保护作用通过激活Akt/GSK信号通路实现。　　 3.rhFGF-21可以恢复细胞供能，从而发挥保护作用。心肌缺血再灌注损伤