【摘 要】
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第一部分经静脉移植的人源骨髓间质干细胞归巢大鼠的梗死心脏;目的:探讨经外周静脉途径移植的人源性骨髓间质干细胞在急性心肌梗死大鼠体内的分布规律,为将来可能的临床应用
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第一部分经静脉移植的人源骨髓间质干细胞归巢大鼠的梗死心脏;目的:探讨经外周静脉途径移植的人源性骨髓间质干细胞在急性心肌梗死大鼠体内的分布规律,为将来可能的临床应用做初步的探索.方法从健康志愿者获取原代骨髓间质干细胞行体外培养、扩增,结扎雄性SD大鼠冠状动脉左前降支制备心肌梗死模型,72h后分别经心梗、正常、假手术大鼠尾静脉注射骨髓间质干细胞1×10<6>,移植术后48h处死动物,于心、肺、肝、脾取材,免疫组化法观察BrdU标记的移植细胞在多个脏器的分布情况;用同样方法观察移植术后1个月标记细胞在各组心脏的分布情况.结论:人源性骨髓间质干细胞经外周静脉移植后可归巢至大鼠的梗死心脏并存活1个月,可能成为将来治疗急性心肌梗死的另一种选择.第二部分 经静脉移植骨髓间质干细胞可改善大鼠梗死心脏的功能;目的:探讨经外周静脉途径移植骨髓间质干细胞治疗急性心肌梗死的有效性和可能的机制.方法采用左前降支冠状动脉结扎术制备大鼠心肌梗死模型,24h后经尾静脉注入同种异体骨髓间质干细胞或磷酸缓冲液;分别于移植后3d和1月取材,采用ELISA和免疫组化技术分析细胞移植对梗死心脏血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,通过免疫组化染色观察移植细胞的分化情况和计数血管密度;超声心动图及血流动力学检查监测移植术后上述时间点大鼠心功能的变化.结论:通过促进梗死周边缺血心肌的血管新生和移植细胞分化,骨髓间质干细胞经外周静脉的移植可作为急性心肌梗死治疗的另一条有效路径.第三部分 梗死心脏SDF-1的高表达可能有助于骨髓间质干细胞的定向归巢;目的:通常认为间质细胞源性因子(Stromal Derived Factor-1,SDF-1)是骨髓源性干细胞归巢过程中的关键因素,本试验分别检测了心梗以后不同时间点SDF-1的表达情况,试图验证一种假设:宿主梗死心肌SDF-1的高表达有助于骨髓间质干细胞归巢至缺血的心脏并进一步改善心功能.方法从雄性SD大鼠获取原代骨髓间质干细胞,经体外扩增、BrdU标记,结扎同品系大鼠冠脉左前降支建立心梗模型,1/2d、1d、2d、4d、8d、16d后分别处死5只,用RT-PCR和Western blot方法分别检测梗死心脏各时间点SDF-1的表达.剩余心梗大鼠按上述时间点随机分为6组(n=15),每只动物在心梗后相应的各时间点分别经尾静脉注入5×10<6>的同种异体骨髓间质干细胞,3天后处死5只,计数归巢至缺血心脏的标记细胞的数量,其余动物于移植后1月处死,分别采用组织学和免疫组化的方法观察胶原的含量,血管新生数量和细胞分化情况,超声心动图检测心梗前、细胞移植前、移植后1个月的心功能.结论:心梗早期,尤其心梗后1天经静脉移植MSCs,归巢大鼠梗死心脏的细胞最多,缺血心肌的血管新生、胶原沉积的减少和心功能的改善最显著,上述现象可能与梗死心脏SDF-1的高表达有关.
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