运用SELEX技术在体外进行膀胱癌T24细胞适配子筛选方法的建立

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目的:运用SELEX技术筛选膀胱癌T24细胞适配子,为后续膀胱癌早期诊断方法的建立奠定基础。方法:在体外人工合成两端各有18bp的固定序列,中间含有52bp的随机序列的单链寡核苷酸文库,通过对PCR反应条件的不断优化与改良,运用SELEX技术对膀胱癌细胞适配子进行反复多轮次的筛选,并用流式细胞技术对得到的不同筛选轮次的适配子亲和力进行测定,将最后一轮筛选得到的产物进行克隆,后交由测序公司进行测序,并用软件对得到的适配子序列的一级结构和二级结构进行分析。结果:1、PCR反应目的产物的量及纯度很大程度上受不同的退火温度及循环次数的影响,本实验中对称PCR反应的最佳退火温度为62℃,最佳循环次数为25次;2、经过10轮SELEX筛选,获得的ss DNA文库与膀胱癌T24细胞的亲和力逐渐上升,表明不同轮次筛选后获得的目的适配子逐步得到了富集。结论:成功建立了运用SELEX技术体外筛选膀胱癌T24细胞高亲和力和特异性的适配子的方法,并得到了亲和力较高的适配子。
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