目的：神经突起生长诱向因子Netrin是一种分泌蛋白，在神经发育所需的轴突诱向及细胞迁移中发挥双重诱向功能——吸引或排斥，主要依赖于生长锥所表达的不同受体结直肠癌缺失蛋白(DCC)或UNC5同源物(UNC5H)，从而传递不同信息。本课题组在从事4～6月孕龄人胎肝cDNA文库大规模测序中发现一种新基因，经生物信息学分析确认为Netrin家族成员，即Netrin-4，已有研究证明Netrin-4具有轴突诱向功能，但尚未明确其受体及信号转导通路。本研究探讨了神经突起生长诱向因子Netrin-4的受体以及Netrin-1已知受体DCC和UNC5H1作为Netrin-4受体的可能性，为从蛋白水平研究其信号转导机制及生物学功能提供依据。方法：构建真核表达载体AP4-Netrin-4、AP4-Netrin-1，转染COS7细胞以获得含有碱性磷酸酶(AP)的融合蛋白。改良Koh法分离、原代培养出生12h内清洁级Wistar乳鼠的嗅球及皮层神经元，采用免疫细胞化学方法鉴定其纯度。AP4-Netrin-4融合蛋白与原代培养第7d的神经元孵育，以亲和细胞化学法及碱性磷酸酶原位显色间接反映Netrin-4受体在神经元的定位(因为该融合蛋白能和Netrin-4受体在细胞表面发生亲和反应，从而可用碱性磷酸酶显色进行检测)。以AP4-Netrin-4为配体，以编码DCC和UNC5H1的真核表达载体转染COS7细胞为对象，采用亲和细胞化学技术检测DCC、UNC5H1作为Netrin-4受体的可能性。再以原代培养神经元为对象，检测受体结合动力学、受体竞争结合动力学。结果：原代培养第7d的嗅球及皮层神经元胞体饱满，突起长并交织成网状：免疫细胞化学染色见神经丝蛋白(neurofilament)在神