目的:抗体是生物化学、分子生物学以及临床药物研究领域中常用到的工具。至今已有43种单克隆抗体被美国FDA批准为临床用药,用于肿瘤、自身免疫性疾病以及感染性疾病的治疗[1,3]。从1975年Milstein和Kohler所发明了杂交瘤技术以来[2],新的单克隆抗体制备技术不断发展,如杂交瘤技术,噬菌体展示技术,核糖体展示技术,mRNA展示技术等,这些技术也已广泛被用于筛选抗原表位。但是无论是杂交瘤技术还是新发展的各种表面展示技术,其操作复杂、耗时长仍远远不能满足科研和临床对单克隆抗体的大量需求。随着二代测序技术的发展,越来越多的抗体遗传信息被破译出来[4],本研究中作者将抗体组最新研究方法应用于人源化单克隆抗体的生产制备中,完善体外大量制备人源化单克隆抗体的流程。方法:本研究结合了单细胞RT-PCR技术以及抗体组测序技术来合成人源化的单克隆抗体。在原核表达系统大量表达蛋白人p53蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔2只,然后从耳缘静脉取出外周血,分离外周血中的B细胞,通过流式分选仪将特异性记忆B细胞分选到提前装有特殊裂解液的96孔板中,裂解并逆转录生成cDNA。用特殊设计的抗体引物通过巣式PCR体系以扩增出抗体分子的可变区。然后将此可变区克隆进新的真核表达载体,构建完成的轻链和重链载体共转染293T细胞,培养一定时间后,收集细胞培养上清,分离并检测其中的抗体。结果:通过本研究的探索,我们结合单细胞RT-PCR技术成功扩增出6个细胞内的抗体重链与轻链基因,快速合成了具有生物功能的人源化单克隆抗体。此外,通过对基因序列信息的测序、比对及分析,我们发现新西兰大白兔体内抗体轻链的突变率明显高于重链的突变率,这一点不同于人类与小鼠,说明在新西兰大白兔的抗体生成与演变过程中,轻链基因的重排可能也扮演了较为重要的角色。