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目的：克隆鹅源粪肠球菌毒力因子gelE基因,构建原核表达载体,在BL21中高效表达,.并对其进行生物信息学分析。方法：1根据NCBI数据库GenBank中登录号为：D85393.1的粪肠球菌明胶酶基因的碱基序列,利用生物信息学软件Primer Premier5.0和Oligo6.0设计一对特异性引物；提取鹅源粪肠球菌总DNA,做为扩增模板；PCR扩增,产物凝胶电泳分离后将目的片段回收；将回收片段与pMD18-T克隆载体连接,转化至DH5a感受态细胞中；筛选阳性克隆菌株,提取重组质粒,进行PCR及单、双酶切鉴定,鉴定正确后送公司测序。2将成功克隆的重组质粒pMD18-T-gelE进行双酶切,回收目的片段,与原核表达载体pET-28a连接,构建pET-28a-gelE重组质粒,转化入BL21感受态细胞中；筛选pET-28a-gelE/BL21阳性菌株,IPTG诱导表达,SDS-PAGE蛋白电泳鉴定明胶酶蛋白。3利用生物信息学软件对表达的明胶酶蛋白序列进行组分、分子质量、滴定曲线与等电点等分析,预测其一级结构中糖基化位点等；根据对其可塑性、亲水性、抗原性指数和表面可及性以及p-转角、无规则卷曲等的综合分析,预测潜在抗原表位。结果：成功克隆了鹅源粪肠球菌菌株毒力因子gelE基因,其碱基序列为1770bp,编码590个氨基酸。本试验成功构建了pET-28a-gelE/BL21表达载体,IPTG诱导蛋白表达后用SDS-PAGE方法鉴定,明胶酶蛋白为72KD,与预期一致。鹅源粪肠球菌明胶酶蛋白多位氨基酸的亲水性指数≥0、AI≥0、表面可及性≥1,具有β-折叠和无规则卷曲,是明胶酶蛋白的B细胞潜在抗原表位。结论：成功克隆鹅源粪肠球菌毒力因子gelE基因,成功表达明胶酶蛋白,综合预测了明胶酶蛋白的B细胞潜在抗原表位。