丙型肝炎病毒抗体对病毒抗原和核酸抑制作用的观察及可能机制的探讨

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tangyanb
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目的探讨丙肝抗体能否抑制丙肝病毒的抗原和核酸,为临床丙型肝炎的治疗和预防提供新思路。方法随机选取48份临床确诊的丙型肝炎患者(RNA、抗原皆阳性,抗体阴性)血清、23份丙肝抗体阳性(RNA、抗原皆阴性)血清和50份阴性血清(RNA、抗原和抗体皆阴性)进行实验,50份阴性血清混合制成一份阴性血清进行实验。实验由丙肝抗体吸收实验、丙肝抗原抑制实验和丙肝RNA抑制实验三部分组成。丙肝抗体吸收实验:先将抗体阳性血清稀释10倍(抗体含量检测阳性结果临界值)后,再进行实验,便于观察实验结果。实验组:100μL 10倍稀释后的抗体阳性血清+100μL抗原阳性血清;对照组:1 00μL 1 0倍稀释后的抗体阳性血清+100μL生理盐水。将样本混匀后置于37℃水浴30min,再使用全自动酶免分析仪进行检测。用ELISA法(双抗原夹心法)测定反应后样本中的抗体含量,结果以OD值表示,与抗体含量成正比。丙肝抗原抑制实验:实验组:200μL抗原阳性血清+200μL抗体阳性血清;对照组:200μL抗原阳性血清+200μL生理盐水。将样本混匀后置于37℃水浴30min,再使用免疫生化分析仪进行检测。用电化学发光法测定反应后样本中的抗原含量。丙肝RNA抑制实验:设实验1组、实验2组和对照组。实验1组:200μLRNA阳性(抗原阳性)血清+200μL抗体阳性血清+200μL阴性血清;实验2组:200μL RNA阳性(抗原阳性)血清+200μL抗体阳性血清+200μL生理盐水;对照组:200μL RNA阳性(抗原阳性)血清+200μL生理盐水+200μL生理盐水。将样本混匀后置于37℃水浴30min。分别使用荧光定量PCR和TMA(转录介导的扩增)两种方法测定样本中的RNA含量。PCR方法检测RNA含量,结果以CT值表示,与RNA含量成反比。TMA法检测RNA的实验中,RNA阳性血清为10倍倍比稀释后样本。TMA方法的结果以OD值表示,与RNA含量成正比。结果丙肝抗体吸收实验:计算R(实验组/对照组)平均值,都小于1且P<0.05,有显著性差异。丙肝抗原抑制实验:R(实验组/对照组)平均值都小于1且P<0.05,差异有统计学意义。丙肝RNA抑制实验:荧光定量PCR检测结果:R(实验2组/对照组)平均值小于1,R(实验1组/对照组)平均值中,有4组大于1;TMA法检测结果:利用公式S=T107+2×T108+T109进行计算(T为TMA法的检测结果,即OD值),将计算出的结果进行比较。实验1组、实验2组分别与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05);实验1组与实验2组比较,也有显著性差异(P<0.05);S平均值比较:S实1均>S实2均,S实1均<S对,S实2均<S对。结论丙肝抗体对丙肝抗原和RNA具有一定的抑制作用,阴性血清中可能存在能够抑制丙肝抗体作用的物质。
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