目的:　　 1.评估E—test法检测利福平和四环素耐药性的可靠程度,为临床提供方便的检测手段。　　 2.检测幽门螺杆菌对克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林、利福平、四环素的最低抑菌浓度,计算耐药率,比较男性与女性、慢性胃炎与消化性溃疡、城市与农村患者幽门螺杆菌感染株的耐药差异,了解海南地区幽门螺杆菌的耐药情况,指导临床医生合理使用抗生素。　　 方法:2008年7月到2009年7月在海南省人民医院行胃镜检查并行幽门螺杆菌培养的患者共321例,年龄17—82岁(平均50岁)。经胃镜检查取得活检标本,在微需氧环境(含5％的O2、10％的CO2、85％的N2)培养。符合菌落、形态特征,尿素酶、氧化酶试验均阳性者确定为幽门螺杆菌。最终,分离出幽门螺杆菌菌株95例用于试验,分离自95位患者.其中男性45例、女性50例,慢性胃炎52例、消化性溃疡41例、胃癌2例,城市人员60例、农村人员35例。试验所需抗菌药物粉末均由Sigma公司生产。所有药物均在使用当天按照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)规定新鲜溶解和配置。用琼脂稀释法和E-test法同时检测幽门螺杆菌对利福平和四环素的耐药性。按照临床实验室标准化研究所(CLSI)的规定进行琼脂稀释法检测利福平和四环素的敏感性。取利福平和四环素的菌悬液分别点样接种到各个不同药物浓度的培养基上。将琼脂平板于37℃微需氧环境(含5％的O2、10％的CO2、85％的N2)中培养,72小时后观察结果。以无菌生长的药物最低稀释度作为最低抑菌浓度(MIC)。按照说明书用E-test法检测利福平和四环素的敏感性。将E—test试剂条贴放在琼脂表面。将琼脂平板于37℃微需氧环境中培养,72小时后观察结果。于椭圆形抑菌环与E—test试剂条的交界点读取MIC值。同样的,用E-test法检测幽门螺杆菌对克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林的耐药性。每次试验用ATCC43504质控菌株作参照。　　 统计学处理:本研究数据处理使用统计软件SAS9.0进行统计分析。计量资料的相关分析若资料服从正态分布使用pearson相关分析,若资料不服从正态分布使用spearman等级相关分析,计数资料组间率的比较采用x2检验。P<0.05为差异有统计学意义。　　 结果:　　 (1)在琼脂稀释法检测的95株幽门螺杆菌菌株中,利福平的耐药率为1.1％,MIC范围0.004～8mg/L,MIC50为0.03125mg/L,MIC90为0.25mg/L；四环素的耐药率为0％,MIC范围0.0156～2mg/L,MIC50为0.125mg/L,MIC90为0.5mg/L。在E-test法检测的95株Hp菌株中,利福平的耐药率为1.1％,MIC范围0.008～8mg/L,MIC50为0.016mg/L,MIC90为0.25mg/L；四环素的耐药率为0％,MIC范围0.016～1mg/L,MIC50为0.094mg/L,MIC90为0.5mg/L。两种方法检测得到的幽门螺杆菌对利福平和四环素的耐药率相同。两种方法测得两种药物对Hp的MIC值分别进行相关分析,得相关系数r值分别为0.90、0.91。两种方法检测得到的MIC值不超过±1稀释度的百分比均为95.8％。　　 (2)在E-test法检测的95株幽门螺杆菌菌株中,克拉霉素的耐药率为27.4％,MIC范围0.016～256mg/L,MIC50为0.25mg/L,MIC90为32mg/L；左氧氟沙星的耐药率为25.3％,MIC范围0.008～32mg/L,MIC50为0.25mg/L,MIC90为16mg/L；阿莫西林的耐药率为6.3％,MIC范围0.016～32mg/L,MIC50为0.032mg/L,MIC90为0.75mg/L。　　 (3)在95位患者的幽门螺杆菌菌株中:　　 45例为男性,对克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐药的菌株数分别为:11、11、2,耐药率分别为24.4％、24.4％和4.4％。50例为女性,对克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐药的菌株数分别为:15、13、4,耐药率分别为30.0％、26.0％和8.0％。两两比较,P值均大于0.05(差异无统计学意义)。　　 52例为慢性胃炎患者,对克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐药的菌株数分别为:12、13、3,耐药率分别为23.1％、25.0％和5.8％。41例为消化性溃疡患者,对克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐药的菌株数分别为:13、11、3,耐药率分别为31.7％、26.8％和7.3％。两两比较,P值均大于0.05(差异无统计学意义)。　　 60例来自城市,对克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐药的菌株数分别为:12、11、1,耐药率分别为20.0％、18.3％和1.7％。35例来自农村,对克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐药的菌株数分别为:14、13、5,耐药率分别为40.0％、37.1％和14.3％。两两比较,P值均小于0.05(差异有统计学意义)。　　 结论:　　 1、琼脂稀释法和E-test法体外检测幽门螺杆菌对利福平、四环素的耐药结果相当。E-test法操作简单,更适合在临床推广运用。　　 2、海南地区幽门螺杆菌体外对克拉霉素、左氧氟沙星的耐药率已经达到27.4％、25.3％,对阿莫西林的耐药率仍然比较低,对利福平敏感,未见对四环素耐药的菌株。克拉霉素和左氧氟沙星不适合用于一线抗幽门螺杆菌治疗,建议行药物敏感试验或使用阿莫西林、四环素治疗。鉴于利福平为抗结核菌的重要药物,为保持利福平对结核菌的高度敏感性,有必要限制它的使用,并且长期监测导致利福平耐药的危险因素。建议用于补救方案的治疗。　　 3、幽门螺杆菌对克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林的耐药性与性别、疾病无关,城市患者的耐药率明显低于农村患者。　　 4、需动态监测本地区幽门螺杆菌的耐药情况。