【摘 要】
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在厦门盐场的饱和盐池水中发现了一株假单胞杆菌属的极端嗜盐细菌,经初步检测认为,该菌可能是一新种,暂定名为Pseudomonasxm.以该菌为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶Sau3
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在厦门盐场的饱和盐池水中发现了一株假单胞杆菌属的极端嗜盐细菌,经初步检测认为,该菌可能是一新种,暂定名为Pseudomonasxm.以该菌为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶Sau3AI部分酶切,回收纯化1~9kb大小的DNA片段.撮载体质粒pUC19,用Sau3AI的同尾酶BamHI将其切成线状并用碱性磷酸酶(CIAP)处理,然后用F4DMA连接酶将回收片段与线状载体连接,转化大肠杆菌JM109,构建Pseudomonasxm部分基因组文库.将获得的重组转化子挑取至含氨苄青霉素(100μg/ml)和6﹪NACl的LB培养基上筛选出能够耐盐的阳性克隆,从中获得与细菌耐盐性有关的约8.8kb的DNA片段.由于该4.2kbDNA片段可能带有较完整的转录构件,将其与植物双元质粒载体pCAMBIA1301重组,转化空心菜愈伤组织,瞬时表达检测呈阳性;再通过SouthernBlot证明,该4.2kb外源DNA片段已经整合至植物基因组中.因此可以初步认为,我们已经初步建立起了空心菜遗传转化系统.
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