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目的非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种环境与遗传因素共同作用导致的慢性代谢性疾病,近年来NAFLD患病率逐年升高,成为包括我国在内的全球肝脏健康问题,因此阐明NAFLD的遗传易感性,制定防治措施至关重要。本文将从以下方面进行探索研究:(1)探讨非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病风险与体力活动的关系。(2)对NAFLD患者进行全基因组拷贝数变异(copy number variation,CNV)检测,筛选出与NAFLD易感性相关的CNV区域。(3)对筛选出的相关CNV区域进行扩大样本量验证,并分析疾病严重程度与拷贝数变异的关系,探索体力活动与拷贝数变异在NAFLD发生发展中是否存在交互作用。方法(1)采用以医院为基础的频数匹配病例对照研究方法,通过统一编制的结构式调查问卷,获得研究对象的体力活动信息,采用代谢当量(MET)对体力活动的强度进行分级,并根据体力活动的频率和时间计算总体力活动水平。运用非条件Logistic回归分析探讨体力活动与NAFLD发病风险的关系。(2)采用微阵列比较基因组杂交芯片技术(array-based comparative genomic hybridization,ACGH)对NAFLD患者进行全基因组CNV检测,通过KOBAS基因注释分析软件对CNV区域内基因所涉及的通路、疾病和功能进行富集分析,并查阅PubMed等数据库,筛选出与NAFLD相关的CNV区域。(3)应用分子流行病学研究方法,收集病例和对照外周血,采用基于TaqMan~?探针的实时荧光定量PCR技术,对NAFLD易感性相关的CNV区域进行扩大样本量验证。结果(1)在调整高血压、糖尿病、BMI、空腹血糖、能量摄入和静坐时间后,多因素非条件Logistic回归分析结果显示:随着体力活动水平的升高,男性NAFLD的患病风险降低。与体力活动水平<1441(MET-分钟/周)者相比,体力活动≥3179(MET-分钟/周)者,NAFLD患病风险降低40%(95%CI=0.40-0.91)。此外,中等强度和高强度的体力活动均可有效降低男性NAFLD患病风险。与无中等体力活动者相比,每周≥685 MET-分钟的中等强度体力活动可使NAFLD的患病风险降低42%(95%CI=0.40-0.86);与无高强度体力活动者相比,每周≥961 MET-分钟的高强度体力活动可使NAFLD的患病风险降低37%(95%CI=0.41-0.95)。(2)通过ACGH检测,结合相关生物信息分析技术,最终发现9个与NAFLD易感性相关的CNV区域,Chr3:57199594-57590187,Chr7:54813380-55274871,chr17:38688567-38738474,chr19:56370486-56416408,chr22:24347959-24390254,chr14:74001651-74022324,chr12:57897795-57918452,chr1:65935075-65959904,Chr20:33470663-33495348,这些区域内分别含有以下NAFLD相关基因:APPL1,EGFR,CCR7,NLRP4,GSTT1,ACOT1,DDIT3,LEPR,ACCS2。(3)由于NAFLD是慢性炎症性疾病,在chr19:56370486-56416408 CNV区域内存在炎症相关基因—NLRP4,因此我们将该区域作为靶区域,NLRP4为靶基因,进行扩大样本量验证,结果显示,病例组NLRP4基因拷贝数缺失频率高于对照组(P<0.05),该基因拷贝数缺失可增加NAFLD的患病风险(OR=4.49,95%CI=1.3-15.52)。进一步分析未发现该基因拷贝数缺失与疾病的严重程度有关联。由于在本次研究中该基因的拷贝数频率过低,未进行体力活动与NLRP4基因拷贝数交互作用的分析。结论(1)男性NAFLD患病风险与体力活动水平呈负相关。中等强度和高强度的体力活动均可有效降低NAFLD的患病风险。(2)NAFLD易感性可能与下列9个区域的拷贝数变异相关:Chr3:57199594-57590187(APPL1),chr7:54813380-55274871(EGFR),chr17:38688567-38738474(CCR7),chr19:56370486-56416408(NLRP4),chr22:24347959-24390254(GSTT1),chr14:74001651-74022324(ACOT1),chr12:57897795-57918452(DDIT3),chr1:65935075-65959904(LEPR),chr20:33470663-33495348(ACCS2)。(3)chr19:56370486-56416408区域内NLRP4基因拷贝数缺失与NAFLD的患病风险相关,但与疾病的严重程度无关。