重组高迁移率族蛋白B1对食管癌细胞侵袭转移的影响

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食管癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤。食管癌在病理分类上包括食管鳞状细胞癌和食管腺癌。  目的:观察重组高迁移率族蛋白B1(High mobility group box 1,HMGB1)对人食管癌TE13细胞侵袭转移的影响并初步探讨其可能机制。  方法:实验分 4 组,分别采用不同剂量(0,100,200,400ng/ml)重组HMGB1刺激食管癌TE13细胞,0ng/ml组为对照组,100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml组为实验组(处理组),经24h后,用CCK8法检测TE13细胞增殖,划痕实验检测TE13细胞侵袭转移情况。Western-blot和荧光定量PCR法检测P65和MMP2蛋白及RNA表达水平。  结果:  1. CCK8实验结果示,OD值分别为3.02±0.11,2.93±0.12,2.98±0.14,2.98±0.07。3个处理组(100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml)的OD值和对照组(0ng/ml)相比无统计学差异(P>0.05)。任两个处理组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。  2. 细胞划痕实验结果示,不同浓度 HMGB1(100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml)刺激食管癌细胞24h后,细胞迁移距离相对于对照组(0ng/ml)增大 (P<0.05)。HMGB1浓度为200ng/ml、400ng/ml组较100ng/ml组细胞迁移距离增多,差异有统计学意义(P<0.05)。200ng/ml和400ng/ml组食管癌细胞的迁移距离无统计学差异(P>0.05)。  3. 荧光定量PCR结果示:  1) P65 mRNA的表达相对含量分别为1.00±0.04,1.53±0.05,2.19±0.03,2.12±0.03。处理组比对照组(0ng/ml)p65 mRNA的表达相对含量升高(P<0.05)。处理组间,200ng/ml、400ng/ml组比较P65 mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),其余组两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);  2) MMP2 mRNA的表达相对含量分别为1.00±0.09,1.11±0.02,2.03±0.07,1.96±0.06。分析显示,200ng/ml、400ng/ml组MMP2 mRNA的表达水平与对照组(0ng/ml)和 100ng/ml 组分别比较均显著性升高(P<0.05),其余组间比较均无统计学意义(P>0.05)。  4. Western-blot结果显示:  1) 细胞总P65蛋白的相对含量为0.35±0.02,0.79±0.03,0.92±0.05,0.87±0.05。统计发现,100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml 处理组的总 P65的蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),其余组间无差异(P>0.05);  2) 细胞总 MMP2蛋白的相对含量为0.22±0.03,0.32±0.08,0.58±0.14,0.55±0.14。经统计,200ng/ml、400ng/ml组HMGB1刺激细胞后的 MMP-2蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05)。200ng/ml组相对于400ng/ml组无明显差异(P>0.05),其余处理组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结果表明,HMGB1刺激能上调NF-κB P65和MMP2蛋白的表达。  结论:HMGB1可以促进食管癌TE13细胞侵袭转移。并且可在RNA和蛋白水平调控P65和MMP2的表达。HMGB1可能通过激活P65信号通路,继而激活MMP2,从而促进食管癌细胞转移侵袭。
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