WRKY等转录因子在植物防御反应途径中起着十分重要的作用，本研究利用经UV处理的抗病辣椒品种的叶片，在优化了其RNA提取方法的基础上提取其总RNA，构建了cDNA文库，筛选文库获得WRKY转录因子的阳性cDNA克隆，为进一步研究WRKY在辣椒UV胁迫下的防御反应中的可能作用奠定基础，主要研究结果如下： 1．cDNA文库的构建 以紫外辐射处理过的辣椒叶片为研究材料，经实验比较后选择小量柱离心式植物总RNA抽提试剂盒来提取总RNA，所提取的RNA可满足构建文库的要求。cDNA文库的构建采用SMART^TM文库构建试剂盒参照其所附的说明进行：利用MMLV反转录酶把总RNA中的mRNA反转录成cDNA，用特异引物进行LD-PCR扩增合成双链cDNA：用CHROMA SPIN-400 Column对cDNA进行分级分离，去除小于400bp的cDNA片段；用带有粘性末端的双链cDNA与入TriplEx2载体连接，利用λ噬菌体包装蛋白对合成的双链cDNA进行体外包装，包装产物侵染E. coli XL-Blue获得cDNA初始文库，含有2.17×10⁶独立的pfu，其扩增后文库的滴度为3.77～3.89×10⁸pfu／m1，插入片段平均大小在1kb左右，随机对插入片断经过PCR鉴定后证实其重组率为93％，表明所构建cDNA文库质量较好，可用于进一步用于辣椒UV响应的特定基因的cDNA筛选。 2．WRKY基因的筛选 根据拟南芥的WRKY蛋白的氨基酸序列，搜索获得辣椒相关EST，并进一步用DNAMAN软件将这些EST拼接起来，根据拼接的序列来设计、合成引物。用基于PCR的96孔板筛选方法从UV处理的辣椒叶片cDNA文库中分离获得阳性克隆，其序列与已经报道的水稻、烟草等作物的WRKY蛋白的cDNA分别有80％、89％以上的同源性，推测该cDNA为辣椒WRKY蛋白的cDNA。