脑胶质细胞瘤指一组起源于神经胶质细胞，具有胶质细胞分化特点的肿瘤，是中枢神经系统最常见的肿瘤，约占颅内肿瘤的40％～50％。目前临床上采取以手术为主的综合治疗，但治疗效果不理想，尤其是恶性胶质细胞瘤。近年来肿瘤学研究发现，肿瘤是由于细胞进行无限制的自主分裂和增殖引起的，而细胞周期的演进是肿瘤发生的“最后通路”。通过改变调控物的作用可以遏制恶性肿瘤细胞周期演进，从而抑制肿瘤细胞的无限制自主分裂。深入研究细胞周期调控物的功能，将为恶性肿瘤基因治疗提供有效的治疗靶点。 D型细胞周期蛋白(Cyclin D)是细胞周期中一种重要的正性调控因子，其包括Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3三个亚型，分别由CCND1、CCND2和CCND3基因编码，定位于人类染色体11q13、12p13和6p21。Cyclin D可以促使细胞通过检查点(check point)，进入自主分裂程序。近年来的研究表明，Cyclin D的异常表达可见于多种实体瘤和血液系统肿瘤，如乳腺癌、食管癌、肺癌、肝癌及淋巴瘤。本实验旨在研究人脑胶质细胞瘤中Cyclin D三种亚型的表达及其与肿瘤细胞增殖活性之间的关系，并对其异常表达的机制进行初步探讨。 第一部分Cyclin D1、Cyclin D2、Cyclin D3和PCNA蛋白在脑胶质 第四军医大学硕士学位论文目目口目...口.目口...........口口目.口目.目里里目皿口.口.里里里互口...口...........1..............目.曰目目目.细胞瘤中的表达 本实验采用免疫组织化学方法，检测正常人脑组织和I一W级胶质细胞瘤中Cyelin DI、Cyelin DZ、Cyelin D3的蛋白表达水平，同时以增殖细胞核抗原(PCNA)作为肿瘤增殖活性指标，观察各蛋白的表达与细胞增殖活性之间的关系。 cyclin Dl在正常人脑组织中仅少量表达，阳性率和平均标记指数分别为25.0%和0.51士0.98，而在脑胶质细胞瘤中呈过度表达，阳性率和平均标记指数分别为55.8%和12.75土14.54，明显高于正常脑组织(P<0.ol)。CyelinDl的表达随病理等级的递增而增高，高恶性度组阳性率和标记指数明显高于低恶性度组(P<0.05)。双元相关性研究发现，Cyclin Dl平均标记指数与PCNA的平均标记指数呈明显正相关(r=0.705，尸<0 .01)。这表明CydinDl在胶质细胞瘤中的表达水平同肿瘤恶性程度和增殖活性有着密切联系，很可能参与了胶质细胞瘤的恶性转化。 Cyclin DZ的表达仅存在于少部分脑胶质细胞瘤(21 .2%)中，虽然肿瘤阳性率和平均标记指数随肿瘤恶性程度升高而呈增高趋势，但各病理等级表达水平无明显差异(P>0.05)。同时，我们发现在22例中出现胞浆阳性着色反应，反应强度也随恶性程度增加而逐渐增高，高、低恶性度肿瘤间无统计学差别(P>O.OS)。虽然细胞周期素在细胞浆中的表达偶有报道，但在胶质细胞瘤中尚为首次。细胞核和细胞浆标记指数同PCNA标记指数均无显著相关关系(P>o.05)o以上结果提示Cyclin DZ与胶质细胞的恶性转化中可能无明显联系。 Cychn D3在正常脑组织中无表达，而在脑胶质细胞瘤中呈异常表达，阳性率和平均标记指数分别为34.6%和8.1壮14.03，高恶性度胶质细胞瘤中阳性率和平均标记指数均显著高于低恶性度肿瘤(尸<0 .05)。此外还发现，Cychn D3平均阳性染色主要见于高恶性度胶质细胞瘤，且标记指数同PCNA标记指数相关性不显著(P>O.05)。这说明它可能是胶质瘤细胞恶变的重要调控因子之一，参与胶质细胞瘤恶性生物学特性的形成。 第二部分Cyclin Dl mR刊…A在脑胶质细胞瘤中的表达 前面的研究表明，Cyclin Dl的过度表达是胶质细胞恶性转化的主要因素，随后采用原位杂交法检测脑胶质细胞瘤及正常脑组织中cyclin DlmRNA的水平。结果显示，正常脑组织中Cyclin Dl mRNA阳性率和平均 4 第四军医大学硕士学位论文县里......且口......标记指数分别为25.0%和0.36土0.67，而人脑胶质瘤中为46.2%和7.54四.49，明显高于正常脑组织(尸<0 .05)。肿瘤随临床病理等级增高，Cyclin DlmRNA的表达水平也逐渐增高，高、低恶性度肿瘤之间存在明显差异 (尸<0 .05)。相关性分析发现，Cyclin D 1 mRNA与蛋白表达之间存在显著正相关(二0.777，尸<0 .01)。这些均提示Cyclin Dl在胶质细胞瘤中的过度表达很可能是通过CCND了基因转录增多引起的。 结论:Cyclln Dl和Cyclln D3在人脑胶质瘤细胞中均被过度表达，其中Cyclin Dl同肿瘤的发生、发展有着密切的联系，而Cyclin D3同肿瘤细胞的恶性表型关系密切。Cyclin DZ可能与脑胶质细胞瘤发生无明显关系，其在胞浆表达的意义需要进一步研究。胶质细胞向肿瘤细胞恶性转化中，Cydin Dl起着重要作用，其过度表达很可能是由CCNDI基因转录增多而引起的。