论文部分内容阅读
目的：研究ATP竞争性GSK-3抑制剂6-bromoindirubin-3’-oxime (BIO)作用于食管鳞癌细胞后,对ABC转运蛋白P-gp、MRP2和凋亡抑制蛋白Bcl-2以及β-catenin表达的影响,探讨它们表达的相互关系；以及对细胞内ATP水平ABC转运蛋白P-gp、MRP2的转运功能的影响,以初步探讨在食管鳞癌细胞中,能量水平的改变与ATP能量依赖性的ABC转运蛋白的转运功能之间的关系；从而初步探讨GSK-3抑制剂对食管鳞癌细胞的多药耐药的影响。方法：运用组织芯片技术、免疫组织化学方法以及图像分析技术检测582例食管鳞癌组织及其癌旁294例正常黏膜、92例单纯增生组织和87例不典型增生上皮组成的组织芯片中MRP2、P-gp、β-catenin及Bcl-2的表达情况,并分析其与各临床病理参数之间的关系。运用ATP竞争性GSK-3抑制剂BIO作用于食管鳞癌EC-109细胞后,运用免疫荧光细胞化学方法,流式细胞技术以及ATP检测试剂盒分别检测分析BIO加药组与对照组相比,食管鳞癌EC-109细胞内MRP2、P-gp、β-catenin及Bcl-2表达的改变,ABC转运蛋白的转运功能以及细胞内游离的ATP水平的改变。结果：1 MRP2、Bcl-2在食管鳞癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织,差别有统计学意义(P<0.01); P-gp、β-catenin在食管鳞癌中的表达均显著低于癌旁正常组织,差别有统计学意义(P<0.01)；随着食管鳞癌的分化程度按高分化-中分化-低分化顺序依次改变,MRP2的表达依次递增,P-catenin在低分化癌组织中的表达大于其在中、高分化癌组织中的表达,Bcl-2在高分化癌组织中的表达低于其在中、低分化癌组织中的表达,差别有统计学意义(P<0.01); Bcl-2、β-catenin的表达与癌组织的浸润深度有关(P<0.01),有淋巴结转移组Bcl-2的表达显著高于无淋巴结转移组(P<0.01),食管鳞癌中P-gp的表达分别与MRP2、Bcl-2的表达呈明显正相关(r=0.288和r=0.253,P<0.01)。2 ATP竞争性GSK-3抑制剂BIO作用食管鳞癌EC-109细胞后,加药组与对照组相比,β-catenin、Bcl-2在胞浆中的表达增强,并且β-catenin出现胞核内累积,MRP2在胞浆和胞膜中表达增强,P-gp在胞浆和胞膜中表达减弱；加药组与对照组相比,细胞内游离的ATP水平增加；ABC转运蛋白对其转运底物罗丹明123的转运功能增强。结论：1 P-gp与MRP2及Bcl-2可作为食管鳞癌多药耐药的预测因子。2 ATP竞争性GSK-3抑制剂BIO作用食管鳞癌EC-109细胞后,β-catenin、Bcl-2在胞浆中的表达增强,并且见β-catenin出现核内累积,这一结果提示GSK-3除参与糖代谢外,还参与了其他重要的生理调节过程,如细胞的分化、增殖与凋亡。β-catenin是Wnt通路的重要成员,在食管鳞癌的发生发展中起着重要作用。3 ATP竞争性GSK-3抑制剂BIO作用食管鳞癌EC-109细胞后,细胞内游离的ATP增加,ABC转运蛋白对其转运底物罗丹明123的转运功能增强。提示了ATP能量依赖性的ABC转运蛋白的转运功能之间存在相互作用,这为进一步阐明ABC转运蛋白在肿瘤细胞多药耐药中的机制提供了新的思路。