论文部分内容阅读
目前,用于神经干细胞(Neural stem cells, NSCs)体外培养的三维支架还不够理想,如存在细胞黏附率不高,细胞分布不均,细胞增殖倍数不大等缺点,为了得到更适于NSCs生长增殖及保持分化潜能的三维支架,本文制备了一种新型三维C-G-Ha-HS复合支架,并以NSCs为种子细胞,研究NSCs在此三维支架内的生长增殖、代谢及分化等情况。采用冷冻干燥法制备一种三维壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素(chitosan-gelatin-hyaluronate-haparin sulfate, C-G-Ha-HS)复合支架,分别测定支架的孔径、孔隙率、吸水率、降解率和材料的官能团；以壳聚糖-明胶(chitosan-gelatin, C-G)支架作为对照组,培养NSCs,并将NSCs注入三维支架,检测细胞黏附率、细胞的生长活力、细胞的代谢,以及检测NSCs在C-G-Ha-HS复合支架上的形貌及细胞的分化潜能等指标,考察NSCs在该支架上的生物相容性。实验结果显示C-G-Ha-HS复合支架的孔径主要分布于90μm-130μm,孔隙率、吸水率均大于95%,支架能降解,支架含有氨基、羧基、酰胺基、磺酸基等官能团,这些特征适合细胞的生长、增殖和黏附等；C-G-Ha-HS复合支架与壳聚糖-明胶(chitosan-gelatin,C-G)支架相比较,前者的细胞黏附率是后者的约2.0倍,细胞增殖倍数前者是后者的约1.4倍；细胞在C-G-Ha-HS复合支架中分布均匀,NSCs在贯穿孔间相互交织成网状；支架内的细胞代谢与生长增殖有一定关系；支架内的细胞以神经球方式生长,且保持分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞的潜能。研究表明,C-G-Ha-HS复合支架材料适合于NSCs的均匀分布、黏附、生长增殖及细胞代谢,而且仍然保持其分化为神经细胞的干细胞特性,因此可用作构建体外NSCs三维培养的支架材料,被用于组织工程和药物筛选。